[发明专利]一种GTP环化水解酶I基因folE及应用

权利要求书

1.一种GTP环化水解酶I基因folE，其特征在于，所述GTP环化水解酶I基因folE的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种利用权利要求1所述GTP环化水解酶I基因folE编码的蛋白。

3.一种利用权利要求1所述GTP环化水解酶I基因folE构建的敲除载体pFED760-folE，其特征在于，将敲除载体pFED760-folE导入植物乳杆菌感受态进而通过同源重组构建folE基因敲除菌株ΔfolE；通过比较野生型菌株与ΔfolE菌株的生理生化差异，分析得到folE基因与细胞形态及菌株生长状态无关，在叶酸合成中起作用。

4.一种如权利要求3所述敲除载体pFED760-folE的构建方法，其特征在于，所述敲除载体pFED760-folE的构建方法包括：

以食源性植物乳杆菌基因组为模板，利用引物对up-EF+up-ER；down-EF+down-ER分别扩增上下游同源臂，PCR产物用作模板，利用引物对up-EF+down-ER扩增得到同源臂敲除片段，该片段纯化后，与温度敏感型质粒pFED760分别用限制性内切酶Hind III和Spe I同步酶切，酶切产物经切胶回收后，进行连接实验，连接产物导入到大肠杆菌DH5α感受态细胞中，提取质粒得到folE基因敲除载体pFED760-folE。

5.如权利要求4所述敲除载体pFED760-folE的构建方法，其特征在于，引物序列如下：

up-EF：5’-CCCAAGCTTGAACGGCGTAATGGTCAAC-3’；

up-ER：5’-TTGAATTGACCACTGTAATTAATTATCAAATGGTGCGG-3’；

down-EF：5’-CCGCACCATTTGATAATTAATTACAGTGGTCAATTCAA-3’；

down-ER：5’-GCACTAGTACACGGTCAACCGGCCTGG-3’。

6.如权利要求4所述敲除载体pFED760-folE的构建方法，其特征在于，GTP环化水解酶I基因folE及上下游同源臂序列如SEQ ID NO:2所示，来源于食源性植物乳杆菌。