[发明专利]一种GTP环化水解酶I基因folE及应用在审
申请号: | 202010078968.1 | 申请日: | 2020-02-03 |
公开(公告)号: | CN111235169A | 公开(公告)日: | 2020-06-05 |
发明(设计)人: | 柳陈坚;李梦月;李晓然 | 申请(专利权)人: | 昆明理工大学 |
主分类号: | C12N15/55 | 分类号: | C12N15/55;C12N9/78;C12N15/66;C12N1/21;A23L33/135;A23L29/00;C12R1/125 |
代理公司: | 北京中仟知识产权代理事务所(普通合伙) 11825 | 代理人: | 田江飞 |
地址: | 650500 云南*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 gtp 环化 水解 基因 fole 应用 | ||
1.一种GTP环化水解酶I基因folE,其特征在于,所述GTP环化水解酶I基因folE的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种利用权利要求1所述GTP环化水解酶I基因folE编码的蛋白。
3.一种利用权利要求1所述GTP环化水解酶I基因folE构建的敲除载体pFED760-folE,其特征在于,将敲除载体pFED760-folE导入植物乳杆菌感受态进而通过同源重组构建folE基因敲除菌株ΔfolE;通过比较野生型菌株与ΔfolE菌株的生理生化差异,分析得到folE基因与细胞形态及菌株生长状态无关,在叶酸合成中起作用。
4.一种如权利要求3所述敲除载体pFED760-folE的构建方法,其特征在于,所述敲除载体pFED760-folE的构建方法包括:
以食源性植物乳杆菌基因组为模板,利用引物对up-EF+up-ER;down-EF+down-ER分别扩增上下游同源臂,PCR产物用作模板,利用引物对up-EF+down-ER扩增得到同源臂敲除片段,该片段纯化后,与温度敏感型质粒pFED760分别用限制性内切酶Hind III和Spe I同步酶切,酶切产物经切胶回收后,进行连接实验,连接产物导入到大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒得到folE基因敲除载体pFED760-folE。
5.如权利要求4所述敲除载体pFED760-folE的构建方法,其特征在于,引物序列如下:
up-EF:5’-CCCAAGCTTGAACGGCGTAATGGTCAAC-3’;
up-ER:5’-TTGAATTGACCACTGTAATTAATTATCAAATGGTGCGG-3’;
down-EF:5’-CCGCACCATTTGATAATTAATTACAGTGGTCAATTCAA-3’;
down-ER:5’-GCACTAGTACACGGTCAACCGGCCTGG-3’。
6.如权利要求4所述敲除载体pFED760-folE的构建方法,其特征在于,GTP环化水解酶I基因folE及上下游同源臂序列如SEQ ID NO:2所示,来源于食源性植物乳杆菌。
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