[发明专利]一种GTP环化水解酶I基因folE及应用在审

专利信息
申请号: 202010078968.1 申请日: 2020-02-03
公开(公告)号: CN111235169A 公开(公告)日: 2020-06-05
发明(设计)人: 柳陈坚;李梦月;李晓然 申请(专利权)人: 昆明理工大学
主分类号: C12N15/55 分类号: C12N15/55;C12N9/78;C12N15/66;C12N1/21;A23L33/135;A23L29/00;C12R1/125
代理公司: 北京中仟知识产权代理事务所(普通合伙) 11825 代理人: 田江飞
地址: 650500 云南*** 国省代码: 云南;53
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摘要:
搜索关键词: 一种 gtp 环化 水解 基因 fole 应用
【权利要求书】:

1.一种GTP环化水解酶I基因folE,其特征在于,所述GTP环化水解酶I基因folE的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种利用权利要求1所述GTP环化水解酶I基因folE编码的蛋白。

3.一种利用权利要求1所述GTP环化水解酶I基因folE构建的敲除载体pFED760-folE,其特征在于,将敲除载体pFED760-folE导入植物乳杆菌感受态进而通过同源重组构建folE基因敲除菌株ΔfolE;通过比较野生型菌株与ΔfolE菌株的生理生化差异,分析得到folE基因与细胞形态及菌株生长状态无关,在叶酸合成中起作用。

4.一种如权利要求3所述敲除载体pFED760-folE的构建方法,其特征在于,所述敲除载体pFED760-folE的构建方法包括:

以食源性植物乳杆菌基因组为模板,利用引物对up-EF+up-ER;down-EF+down-ER分别扩增上下游同源臂,PCR产物用作模板,利用引物对up-EF+down-ER扩增得到同源臂敲除片段,该片段纯化后,与温度敏感型质粒pFED760分别用限制性内切酶Hind III和Spe I同步酶切,酶切产物经切胶回收后,进行连接实验,连接产物导入到大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒得到folE基因敲除载体pFED760-folE。

5.如权利要求4所述敲除载体pFED760-folE的构建方法,其特征在于,引物序列如下:

up-EF:5’-CCCAAGCTTGAACGGCGTAATGGTCAAC-3’;

up-ER:5’-TTGAATTGACCACTGTAATTAATTATCAAATGGTGCGG-3’;

down-EF:5’-CCGCACCATTTGATAATTAATTACAGTGGTCAATTCAA-3’;

down-ER:5’-GCACTAGTACACGGTCAACCGGCCTGG-3’。

6.如权利要求4所述敲除载体pFED760-folE的构建方法,其特征在于,GTP环化水解酶I基因folE及上下游同源臂序列如SEQ ID NO:2所示,来源于食源性植物乳杆菌。

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