[发明专利]中药蜥蜴及其伪品石龙子的鉴别方法

权利要求书

1.一种中药蜥蜴及其伪品石龙子的鉴别方法，其特征在于，包括步骤：

精密称取每批蜥蜴及石龙子干燥药材粉末，分别加入稀释4倍的pH6.7的Tris-HCl缓冲液，置于预冷的研钵中研磨成匀浆状，冰浴超声30 min，0.8×10⁴ r·min^-1冷冻离心10 min收集上清液后，再1.2×10⁴ r·min^-1冷冻离心10 min，收集上清液，与等体积40%蔗糖溶液混合，作为供试品溶液；

采用Native-PAGE电泳方法进行实验，根据获得的结果按公式：相对迁移率R_f=蛋白质迁移距离/指示剂迁移距离，计算出各谱带的R_f值，将所有谱带按R_f值由小到大依次编号并以共迁移谱带出现与否作为鉴别依据，分别获得蜥蜴和石龙子的特征谱带，蜥蜴的特征谱带为R_f值0.37；石龙子的特征谱带为R_f值0.30、0.64和0.77；

在Native-PAGE电泳实验中，分离胶体积分数7%，浓缩胶体积分数3%，胶厚1.5 mm，每条泳道上样30 μL，电极缓冲液为不含SDS的Tris-甘氨酸缓冲液，在负极槽电泳缓冲液中滴加一滴溴酚蓝指示剂；电泳开始时稳流15 mA，待溴酚蓝指示剂到达两胶交界处后，稳流20mA；待指示剂行至胶板下沿1 cm停止电泳，整个过程在冰浴中进行，用0.1%考马斯亮蓝R-250进行染色，放入脱色液中脱色直到背景清晰；

根据蜥蜴和石龙子不同的特征谱带区分蜥蜴及石龙子样品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：根据电泳谱带的原始二态数据矩阵进行聚类分析，获得Native-PAGE电泳图谱聚类图；根据Native-PAGE电泳图谱聚类图得到的不同分类结果区分蜥蜴及石龙子样品。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的分离胶的配制方法为丙烯酰胺 14g、双丙烯酰胺 0.37 g用超纯水定容至50 mL，过滤，4℃避光保存；浓缩胶的配制方法为：丙烯酰胺 2.5 g、双丙烯酰胺 0.625 g用超纯水定容至 25 mL，过滤，4℃避光保存。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：脱色液的配制方法为：甲醇100 mL、冰醋酸35 mL加纯净水至500 mL。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：Native-PAGE电泳实验中的电极缓冲液的配制方法为Tris 0.6 g、甘氨酸 2.88 g用超纯水定容至1000 mL。

6.根据权利要求1、2、3或4所述的方法，其特征在于：每批蜥蜴及石龙子干燥药材粉末过40目筛。