[发明专利]一种小鼠脑片神经元复苏液、制备方法及其应用

说明书

本发明涉及离体脑片的电生理记录领域，公开了一种小鼠脑片神经元复苏液、制备方法及其应用，本发明提供的小鼠脑片神经元复苏液组分包括N‑甲基‑D‑葡萄糖胺、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠、氯化钙和D‑葡萄糖，本发明通过调节D‑葡萄糖的浓度来调节脑片神经元复苏液的渗透压为300～310mOsm/L，并使用盐酸调节pH为7.3～7.4。本发明脑片神经元复苏液在用于离体脑片的神经元复苏过程中，能促进受损神经元胞体及神经元树突和轴突的自我修复，进而大幅提高脑片神经元的存活率。

技术领域

本发明涉及离体脑片的电生理记录技术领域，尤其涉及一种小鼠脑片神经元复苏液、制备方法及其应用。

背景技术

长期以来，制备出神经元成活率高的脑片一直是广大离体脑片神经电生理记录者的困扰，除了实验技术难以掌握之外，有一个重要的因素就是不能制备出成活率高的神经元的脑片。神经元成活率高的脑片代表着所记录的神经元损伤小，更接近在体状态；而损伤小的脑片预示着更长的记录时间。要得到成活率高的脑片，就需要有更适宜的将使用震动切片机制备的脑片中的神经元进行复苏的培养液。然而到目前为止，仍未有成活率高的脑片神经元复苏液的制备方法，研究者只能被动的在一片片脑片中寻找存活的神经元进行记录，严重影响了他们的工作效率进而影响到实验结果的可靠性。因此，寻找更适合脑片中神经元复苏的脑片神经元复苏液显得迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的是提供一种小鼠脑片神经元复苏液、制备方法及其应用，本发明小鼠脑片神经元复苏液能促进受损神经元细胞及神经元树突和轴突的自我修复，大幅提高脑片神经元的存活率。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种小鼠脑片神经元复苏液，该小鼠脑片神经元复苏液的pH保持为7.3～7.4，其包含N-甲基-D-葡萄糖胺、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠、氯化钙和D-葡萄糖，其中，N-甲基-D-葡萄糖胺的浓度为90～100mM，氯化钾的浓度为2～2.5mM，磷酸二氢钠的浓度为1～1.5mM，硫酸镁的浓度为1.25～1.5mM，碳酸氢钠的浓度为25～30mM，氯化钙的浓度为2～2.5mM，D-葡萄糖的浓度使得所述小鼠脑片神经元复苏液的渗透压为300～310mOsm/L。

在一个实施方式中，所述N-甲基-D-葡萄糖胺的浓度优选为90mM。

在一个实施方式中，所述氯化钾的浓度优选为2.5mM。

在一个实施方式中，所述磷酸二氢钠的浓度优选为1.25mM。

在一个实施方式中，所述硫酸镁的浓度优选为1.25mM。

在一个实施方式中，所述碳酸氢钠的浓度优选为25mM。

在一个实施方式中，所述氯化钙的浓度为2.5mM。

本发明还提供了上述小鼠脑片神经元复苏液的制备方法，所述制备方法包括：

1)称量N-甲基-D-葡萄糖胺、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠和氯化钙，加水溶解，配置混合溶液；

2)向步骤1)得到混合溶液中加入作为渗透压调节剂的D-葡萄糖，搅拌溶解；

3)向步骤2)得到的溶液中加入盐酸调节pH至7.3～7.4，得到小鼠脑片神经元复苏液。

本发明还提供了上述小鼠脑片神经元复苏液或上述制备方法制备得到的小鼠脑片神经元复苏液在离体脑片制备中用于使小鼠脑片神经元复苏的用途。

与现有技术相比，本发明小鼠的组分包括N-甲基-D-葡萄糖胺、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠、氯化钙和D-葡萄糖，本发明通过调节D-葡萄糖的浓度来调节脑片神经元复苏液的渗透压为300～310mOsm/L，并使用盐酸调节pH为7.3～7.4。本发明提供的小鼠脑片神经元复苏液在用于离体脑片的神经元复苏过程中，能促进受损神经元胞体及神经元树突和轴突的自我修复，进而大幅提高脑片神经元的存活率。