[发明专利]基于核酸质谱技术检测心血管疾病用药相关基因的核酸组合物、试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开了一种基于核酸质谱技术检测心血管疾病用药相关基因的核酸组合物、试剂盒和检测方法，涉及基因检测技术领域。本发明公开的核酸组合物包括用于进行多重PCR扩增心血管疾病用药相关基因的扩增引物组以及用于进行单碱基延伸反应的延伸引物组。使用本发明提供的核酸组合物、试剂盒或检测方法，采用核酸质谱技术可以检测心血管疾病用药相关基因的15个位点的基因型，其具有灵敏度高，特异性强，结果易于识别，并提高了准确性，操作方便等特点，本发明为心血管疾病用药相关基因的检测提供了更为可靠的检测手段，也为心血管疾病的个体化用药提供了更为合理的用药指导。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体而言，涉及一种基于核酸质谱技术检测心血管疾病用药相关基因的核酸组合物、试剂盒和检测方法。

背景技术

基于MassARRAY平台的iPLEX技术利用单碱基延伸技术和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术，可以实现多重扩增反应基因型检测。主要特点为进行单管多重PCR，在PCR扩增产物中加入序列特异延伸引物，延伸引物设计位于突变位点前一个碱基，在突变位点处可延伸一个碱基。然后将制备的样用品分析物与芯片基质共结晶，将该晶体放入质谱仪的真空管，而后用瞬时纳秒(10^-9s)强激光激发，由于基质分子经辐射所吸收的能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，核酸分子就会解吸附并转变为亚稳态离子，产生的离子多为单电荷离子，这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能，进而在一非电场漂移区内按照其质荷比率加以分离，在真空小管中飞行到达检测器。MALDI产生的离子常用飞行时间(Time-of-Flight,TOF)检测器来检测，离子质量越小，就越快达到。MassARRAY SNP检测的质谱范围为4000到8500Dalton，检测过程大体可分为分子生物学反应、质谱阵列的点样和质谱检测三个过程。

目前单类药物用药相关基因检测产品已有获批，考虑到临床上心血管疾病多伴有其他并发症，患者常有多药物联用的情况，但由于药物间的相互作用、患者自身情况等多方面因素的影响，易导致不良反应的发生。所以针对心血管常用药，基因检测能更有效地指导患者用药。

血管紧张素Ⅱ是肾素-血管紧张素系统的重要体液因子，其90％以上的效应通过血管紧张素Ⅱ的1型受体(AGTR1)介导。AGTR1的1166AC基因多态性可影响ARB类药物的治疗效果，A/A基因型个体对ARB类药物更加敏感，降压效果更好。

血管紧张素转换酶(angio tensin converting enzyme，ACE)是肾素-血管紧张素系统的关键酶，由ACE基因编码，是ACEI类药物的作用靶点。ACE基因的第16号内含子中存在插入(Insertion,I)/缺失(Deletion,D)序列，会导致ACE基因呈现I/D多态性，从而影响ACEI类药物的疗效。

β肾上腺素受体是β受体阻滞剂类药物的作用靶点，由ADRB1基因编码。该受体属于G蛋白偶联受体超家族，通过与Gs蛋白偶联调节细胞内cAMP和L型钙通道的开放频率。ADRB1的1165GC多态性可影响β受体阻滞剂的疗效。

CYP2D6是CYP450家族成员之一，已知经其催化代谢的药物多达80余种，CYP2D6基因多态性直接影响其酶活性，进而影响药物的代谢效率。不同个体CYP2D6活性最大可相差1000倍。中国人群中CYP2D6常见的导致酶活性降低的等位基因是CYP2D6*10，该等位基因导致中间代谢(IM)表型，美托洛尔药物代谢效率降低。

CYP2C9是CYP450家族成员之一，占肝微粒体P450总量的20％，该酶催化约12％的临床常用药物。中国人群中主要存在的遗传变异为CYP2C9*3，导致酶活性降低。