[发明专利]一种结合GPC3融合蛋白的制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种结合GPC3融合蛋白的制备方法及应用。本发明提供的融合蛋白包含抗GPC3抗体和VEGF受体的胞外段。本发明提供的结合GPC3融合蛋白能够在靶向肿瘤特异性表达蛋白GPC3的同时，通过VEGF受体胞外段对VEGF的捕获阻断肿瘤的血管新生，达到肿瘤预防和治疗的目的。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种结合GPC3融合蛋白的制备方法及应用。

背景技术

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3，GPC3，SEQ ID NO：11)是细胞膜表面的硫酸乙酰肝素蛋白多糖。GPC3核心蛋白由相对分子质量为40KD的N-末端蛋白和30KD的膜结合的C-末端蛋白组成。C-末端通过糖基磷脂酰肌醇锚蛋白(glycosyl-phosphatidylinositolanchor，GPI)锚定在细胞表面，可结合肝素结合型蛋白，如生长因子。GPC3基因在不同的组织中表达差异很大，其在肝细胞癌组织中高表达，而在非肿瘤肝组织、肝细胞腺瘤、胆管癌、肝内胆管细胞癌、胆囊癌和肝脏转移性肿瘤中低表达甚至不表达。GPC3中Arg358和Ser359之间的酶切位点酶切后产生相对分子质量40KD的N-末端片段和30KD的C-末端片段。

有研究证明，C-GPC3诱导产生的单克隆抗体会产生抗体依赖性的细胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity，ADCC)。US9790267B2、US20100248359A1、WO2004022739、US9409994B2、CN108164600A、CN107982538A和CN109988240A等专利中明确了抗GPC3抗体或者结合GPC3的蛋白片段，这些抗体或者结合片段通过重组表达人源化的抗体或者嵌合抗原受体T细胞等形式用于癌症尤其是肝癌的治疗。中国专利201911053957.1中公开了一种抗人GPC3单克隆抗体，是以人源GPC3为靶点，基于噬菌体展示技术，开发的特异性、高亲和力的纳米抗体，是肿瘤免疫治疗的潜在药物。

血管新生支撑着肿瘤的发生发展过程，它在肿瘤的扩增、侵袭、转移等方面发挥着巨大的促进作用。在发挥血管新生作用中，VEGF(vascular endothelial growth factor，VEGF)及其受体(VEGFR)信号通路占据着主导地位。VEGF的靶向药物可以与特定的内皮细胞受体结合，对肿瘤细胞的生长产生抑制作用，从而达到治疗目的。药物对VEGF产生抑制，肿瘤细胞无法顺利得到血液供应，其生长和增殖均会受到影响。专利WO1998045332、WO2003075840、WO2016060297、US20120003641所提供的针对VEGF或其受体的治疗性抗体均对肿瘤显示出良好的疗效。中国专利201710444942.2中公开了一种抗人VEGF(VEGFA)的抗体，该抗体的重链可变区包括CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种，抗体与VEGF结合，抑制或阻断VEGF与VEGFR的结合，从而影响其后续的信号通路以及相应的生物学功能，在抗肿瘤中有很好的应用前景。

现有技术中，未有将GPC3和VEGF二者相关蛋白结合的技术方案的公开。

针对上述技术空白，本发明提供的融合蛋白，在靶向肿瘤细胞后通过抗体依赖的细胞毒性作用和补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity，CDC)效应杀伤肿瘤，同时阻断VEGF和其受体的信号通路，为肿瘤的治疗提供了一种新的手段。

发明内容

本发明提供了一种结合GPC3融合蛋白的制备方法及应用。本发明提供的结合GPC3融合蛋白在靶向肿瘤特异性表达蛋白GPC3的同时，通过VEGF受体胞外段对VEGF的捕获阻断肿瘤的血管新生，达到肿瘤预防和治疗的目的。

一方面，本发明提供了一种结合GPC3的融合蛋白。

具体地，所述的融合蛋白包含抗GPC3抗体和VEGF受体的胞外段。

具体地，所述的抗GPC3抗体序列包含轻链可变区和重链可变区。