[发明专利]一种参葵通脉颗粒的质量检测方法

权利要求书

1.一种参葵通脉颗粒7种有效成分的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)参葵通脉颗粒供试品溶液的制备：

参葵通脉颗粒，由江苏省中医院制剂室制备：称取处方量的黄芪、灵芝、丹参、淫羊藿、黄蜀葵花、桂枝、茯苓、陈皮，依据优选的最佳提取工艺，加入12倍水量，浸泡0.5h，加热回流提取3次，每次1.5h，提取液合并，过滤，滤液减压浓缩，离心，以适量糊精为辅料，置流化床中喷雾制粒，干燥，即得参葵通脉颗粒30g；

取参葵通脉颗粒0.625g，至50mL容量瓶中，加适量90％甲醇溶解，超声30min，280W，50kHz，放至室温，补足甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，收集续滤液，取适量续滤液于离心浓缩机蒸干，并用初始流动相30％乙腈，复溶至原体积的一半，加入适量混合内标溶液，混匀，即得供试品溶液；

(2)混合对照品溶液的制备：

分别精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的对照品，分别置于10mL的容量瓶中，甲醇溶解、超声，并定容至刻度，制得质量浓度分别为783μg/mL、852μg/mL、823μg/mL、1795μg/mL、804μg/mL、1064μg/mL和1828μg/mL的对照品溶液；然后分别吸取以上7种对照品溶液适量，置于同一10mL容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度并混匀，制得浓度分别为142.636μg/mL、90.237μg/mL、299.823μg/mL、147.726μg/mL、324.526μg/mL、173.628μg/mL、617.404μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的混合对照品溶液；

(3)内标溶液的制备：

分别精密称取替硝唑和咖啡酸对照品适量，置于10mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制得质量浓度分别为400μg/ml和390μg/ml的内标溶液；分别取适量内标溶液，用30％乙腈水溶液稀释，得到浓度分别为16μg/mL和15.6μg/mL的替硝唑和咖啡酸的混合内标溶液；

(4)线性关系建立：

分别吸取步骤(2)的混合对照品溶液，用30％乙腈水溶液依次稀释5倍，得到5个系列质量浓度的混合对照品溶液；然后取5个不同浓度的混合对照品溶液各180μL，分别加入25μL步骤(3)制备得到的混合内标溶液，涡旋混匀，然后依次取2μL注入超高效液相色谱仪进行测定；以质量浓度为横坐标X，对照品与内标峰面积比值为纵坐标Y，进行线性回归；得到毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的线性回归方程；

(5)含量测定

取步骤(1)的供试品溶液，加入适量混合内标溶液，混匀，然后取2μL注入超高效液相色谱仪进行测定；并根据步骤(4)的线性回归方程，测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的含量；

步骤(4)和步骤(5)的色谱条件为：色谱柱：预柱Kromasil 100-3.5-C18，色谱柱Kromasil 100-3.5-C18，规格150×2.1mm；流动相：6.5mmoL/L乙酸铵水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱；自动进样器温度：10℃；柱温：30℃；流速：0.2mL·min^-1；

梯度洗脱条件为：0～1.5min，30％B；1.5～6min，30～80％B；6～7.2min，80％B→95％B；7.2～7.8min，95％B；7.8～10.5min，95％B→30％B；10.5～12min，30％B；

毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B和内标物替硝唑和咖啡酸的质谱参数如下：

2.根据权利要求1所述的参葵通脉颗粒7种有效成分的质量检测方法，其特征在于：毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黄芪甲苷、丹参素钠、金丝桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的线性回归方程如下：

成分	回归方程	2]]>
毛蕊异黄酮葡萄糖苷	Y＝0.0714845+0.172954*X	0.9923
淫羊藿苷	Y＝0.105823+0.650492*X	0.9974
黄芪甲苷	Y＝0.00112711+0.0024567*X	0.9930
丹参素钠	Y＝-0.133008+0.0740296*X	0.9944
金丝桃苷	Y＝-1.18138+0.200215*X	0.9944
橙皮苷	Y＝-1.06837+0.394587*X	0.9908
丹酚酸B	Y＝-0.794318+0.0198573*X	0.9941

。