[发明专利]一种流感病毒相关宿主基因突变体的筛选方法有效
| 申请号： | 202010065256.6 | 申请日： | 2020-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN112553251B | 公开（公告）日： | 2022-10-14 |
| 发明（设计）人： | 常德;D·查尔斯;S·罗克什 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军总医院第三医学中心 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/10;C12Q1/70;C12Q1/02;C40B50/06;C12R1/93 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 邓宇 |
| 地址： | 100039*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 流感病毒 相关 宿主 基因 突变体 筛选 方法 | ||
1.一种流感病毒相关宿主基因突变体的筛选方法，其特征在于，步骤如下：
1）建立随机基因突变文库：用CAG-tTA质粒转染人肺癌细胞株，获得稳定表达且受四环素调控的转录激活因子的Tet-off细胞株；将基因搜寻载体和有效表达转座酶的质粒，共转染所述Tet-off细胞株，获得全基因组肺上皮细胞基因突变文库；所述基因搜寻载体包含四环素反应元件、
2）筛选抗甲型流感病毒H1N1-WSN毒株的突变肺上皮细胞株：利用H1N1-WSN流感病毒感染步骤1)获得的全基因组肺上皮细胞基因突变文库，按照MOI=5加入H1N1-WSN流感病毒，培养2周后挑取单个克隆，经筛选后得到抗H1N1-WSN流感病毒的细胞株；
3）流感病毒感染相关宿主基因的克隆：提取步骤2）中获得的抗H1N1-WSN流感病毒的细胞株基因组DNA，经Sau3A1限制性内切酶后连接接头DNA，然后进行Splinkette PCR，测序获得基因搜寻载体插入两端的DNA序列，即为流感病毒相关宿主基因突变体。
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