[发明专利]一种TXNDC16基因在制备检测肺癌化疗药耐药性检测试剂盒中的应用

说明书

一种TXNDC16基因在制备检测肺癌化疗药耐药性检测试剂盒中的应用，属于基因突变技术领域，为了探究TXNDC16基因与肺癌化疗药耐药性的关系，本发明提供了一种TXNDC16基因在制备检测肺癌化疗药耐药检测试剂盒中的应用，是将TXNDC16基因下游序列经插入突变后用于检测肺癌化疗药耐药性；所述插入突变是指所述TXNDC16基因下游30,655bp处插入外源基因，所述外源基因核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明可用于肺癌化疗药耐药性检测。

技术领域

本发明具体涉及一种TXNDC16基因在制备检测肺癌化疗药耐药性检测试剂盒中的应用，属于基因突变技术领域。

背景技术

肺癌是目前全世界癌症死因的第一位，绝大多数病人在诊断时已发生转移，由于手术治疗已不适合，化学药物治疗成为治疗癌症患者的最主要手段。然而，在化疗中最困扰临床医生的问题是癌细胞化疗耐药而导致的化疗药物治疗效果差甚至无效。造成这一问题的最根本原因是人类对癌细胞化疗耐药的机制不清，从而引起没有很好的应对策略。近年来，合成致死的概念被提出，其基本原理是当两个基因同时突变时对细胞具有致死作用，而其中任一基因单独突变时均不会造成细胞死亡。目前在癌症研究中已发现一些基因的相互作用能够促进肿瘤细胞的凋亡或抑制其生长。因此，筛选和鉴定控制肺癌化疗耐药的关键基因、进而研究肺癌化疗耐药的分子机理，从而开发新型肺癌治疗产品联合用药是治疗的关键步骤，也是研究和治疗肺癌化疗耐药的一个突破口。

近年来，随着人类基因组学、转录组学和蛋白质组学的发展，很多方法都被用来筛选癌症化疗耐药相关基因，包括基因芯片、microRNA芯片、小分子RNA干扰(siRNAs)、化学诱变DNA和逆转录病毒插入突变等技术。例如，利用RNA干扰(RNAi)技术已经筛选出乳腺癌治疗耐药的关键基因CDK10，肺癌的顺铂化疗耐药相关的BRCA和P53信号通路基因，以CAL51细胞为模型筛选到PARP抑制剂敏感基因CDK5、MAPK12、PLK3、PNKP、STK22c和STK36等。然而，该技术需要提前获知靶基因的序列，才能设计出沉默此靶基因的dsRNA，这样会缩小基因筛选的范围，往往会漏掉一些未知基因；另外，RNAi技术只能将靶基因敲除，无法过表达某个基因，需要配合使用cDNA文库技术，这同时也限制了其应用，但仍无法筛选到未知基因。此外，Whiteside等利用微阵列技术分别对比肺癌细胞株接受顺铂治疗前后的基因表达差异，发现44个基因表达差异，为临床上肺癌患者的个体化治疗奠定了一定的基础。然而，利用基因芯片分析不同肿瘤细胞耐药株间基因表达差异，所得到的基因与化疗耐药间并不具备明确的因果关系，只能理解为是一种化疗耐药的相关基因，因为肿瘤细胞的化疗耐药是一个非常复杂且动态的过程，其中可能很多关键基因发挥了作用，但是等到耐药株形成后这些基因的表达水平重新回到原始水平，结果重要的基因极有可能被忽略。此外，Microarray比较后数据庞大，有成千上万的基因表达发生差异，为后续的分析工作带来了巨大困难。因此，找出控制肺癌化疗耐药的关键基因，亟需一种研究方法能够并鉴定出控制肺癌化疗耐药且与其发生具有因果关系的重要基因。

插入突变是利用已知的外源DNA插入序列作为标记，破坏基因的结构而导致突变，可以直接验证个别基因与所筛选性状之间关系，是一种理想的功能基因组学研究方法。目前有文献报道利用该技术已筛选到与肿瘤发生、转移相关基因，但是困扰该方法应用的问题在于其插入突变的效率，随机基因突变调控技术(Controlled Random GenePerturbation Technology，CRGP)是本课题申请人基于整合转座子插入突变技术、反义RNA技术和真核基因表达调控技术发明的一种功能基因组学技术。CRGP能产生全基因组纯合基因突变；提供全基因组基因筛选和基因功能分析；同时发现并证实其基因突变和功能表达的关系；系统性基因功能定位和分析其在遗传和生化通路中的功能特点；快速分离与疾病有关基因和变阻器式基因表达调控。利用该技术或基于该技术原理已成功地筛选和鉴定出与许多重大疾病相关的基因和信号转导通路，包括肿瘤形成、肿瘤耐药分子机理、癌症侵袭和转移、流感病毒病理机制和老年性痴呆症病理机制研究。

发明内容