[发明专利]一种具有广谱性识别N9亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种具有广谱性识别N9亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的单克隆抗体及其应用。所述的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC No.18899的杂交瘤细胞株1C4分泌产生。本发明公开的单克隆抗体1C4除了可以与H7N9反应外，还可以与H1N9和H11N9等位于不同进化分支的N9亚型禽流感病毒发生特异性反应，具有良好的广谱性，同时对N9血清也具有良好的阻断效果。本发明还公开了利用单克隆抗体1C4制备的用于检测N9亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白抗体的阻断ELISA检测试剂盒，该试剂盒具有良好的特异性和敏感性，适用于大规模临床血清样品中N9抗体的检测，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种可分泌具有广谱性识别N9亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，同时涉及该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体及其应用。本发明属于生物技术领域。

背景技术

禽流感(AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽类急性传染病，被世界动物卫生组织列为A类烈性传染病。禽流感病毒(AIV)是一种单股负链分节段的RNA病毒，亚型众多，可根据其表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原差异分为16种不同的HA亚型和9种不同的NA亚型，此外，还在蝙蝠体内分离到H17N10和H18N11亚型流感病毒。

NA是由片段6编码的一种II型糖蛋白，NA蛋白在结构上形成一个异源四聚体，每个NA蛋白单体都是由一段氨基端短的胞质区，疏水的跨膜区，茎部区和球状的头部区组成。NA蛋白具有神经氨酸酶活性，在病毒感染的后期，可以切割宿主细胞表面以及新生病毒粒子表面的唾液酸，进而促进新形成病毒粒子的释放和扩散，阻止新生病毒粒子在细胞表面的聚积。

H7N9亚型禽流感病毒不仅危害家禽生产，而且还对人类健康构成严重威胁。2013年3月，我国上海报道全球第一例人感染H7N9病例，随后该疫情迅速蔓延至全国各地，截止至2019年5月10日，已有1568人感染H7N9，其中615人死亡。因此，加强对N9亚型禽流感病毒的监测具有重要的公共卫生学意义。目前，国家流感中心的周剑芳研究员已成功研制出能够识别H7N9亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的单克隆抗体，然而，国家禽流感参考实验室监测数据显示，当前国内流行的N9亚型禽流感病毒除了H7N9外，还包括H1N9和H11N9等其他亚型组合，并且不同病毒之间的N9基因进化关系差异显著，给N9亚型禽流感病毒的监测增加了难度，因此，急需开发一种能够广谱性识别不同类型N9亚型禽流感病毒的诊断方法。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种能够稳定分泌具有广谱性识别N9亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的目的之二是提供一种由上述杂交瘤细胞株所分泌的具有广谱性识别N9亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的单克隆抗体。

本发明的目的之三是将上述单克隆抗体应用于N9亚型禽流感的诊断和治疗。

本发明达到上述目的是通过以下技术方案实现的：

本发明首先选取3株位于不同进化分支的N9亚型禽流感病毒，将灭活后病毒依次间隔14天免疫6周龄BALB/c雌性小鼠，取免疫后小鼠脾脏与SP2/0细胞融合。利用间接免疫荧光方法筛选到1株能够稳定分泌具有广谱性抗N9亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，命名为1C4，分类命名为杂交瘤细胞，该细胞株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.18899，保藏时间为2019年12月4日。