[发明专利]一种从微生物中提取纤维级蛋白的生产方法

权利要求书

1.一种从微生物中提取纤维级蛋白的生产方法，其特征在于，

包括以下步骤：

(1)配制化学裂解液：将质量百分比计的10％的氢氧化钠和5％的亚硫酸钠，余量为水，搅拌至完全溶解，得化学裂解液；

(2)离心分离甲醇蛋白菌体：将甲醇蛋白发酵液在10500rpm条件下进行离心分离，离心后的重相为甲醇蛋白菌体，用于精蛋白提取；离心后的轻相为酶液，进行酶的提取；

(3)水洗：将步骤(2)获得的甲醇蛋白菌体中加入2倍体积的pH6.0的脱盐水，在30rpm条件下搅拌水洗20min，对脱盐水洗的甲醇蛋白溶液在10500rpm条件下进行离心分离，弃上清液，得纯净的甲醇蛋白菌体，根据菌体颜色及灰分指标，再水洗2次，除去菌体表面盐分及细胞色素；

(4)裂解：将步骤(3)水洗后获得的甲醇蛋白菌体加入到步骤(1)制备的化学裂解液中，添加量为化学裂解液质量分数的50％，30rpm条件下搅拌18min混匀，69℃保温2.75h，此过程中，裂解液pH值会有下降，补加氢氧化钠溶液调整到pH12，菌体破裂，菌体蛋白溶解于碱性裂解液中，得提取液，提取液温度降至27.5℃，加入盐酸或硫酸调节提取液pH值至9.5，有蛋白质析出，得分子量为5-20万的蛋白质溶液，用于蛋白纤维的制造；

(5)离心分离提取液：将步骤(4)pH处理后的蛋白质溶液在10500rpm条件下进行第一次离心分离，离心后的轻相后续进行蛋白沉淀，向离心后的重相中加入0.85倍体积步骤(1)制备的化学裂解液，在69℃下保温70min，保温结束后，温度降至27.5℃，加入盐酸或硫酸调节pH值至9.5，在10500rpm条件下第二次离心分离，第二次离心的轻相与第一次离心的轻相合并至储罐成清液，第二次离心后的重相为蛋白提取后的细胞残渣，后续进行细胞壁多糖的提取；

(6)酸沉：在步骤(5)储罐中清液流加盐酸或硫酸，在30rpm条件下搅拌均匀，调节pH值至4.5，随pH值降低，清液中蛋白开始沉淀，汲取沉淀的蛋白，蛋白沉淀阶段，保证储罐温度在0-35℃；

(7)离心收集浓缩蛋白液：将步骤(6)中的蛋白在10500rpm条件下进行离心分离，离心后重相为浓缩蛋白液，离心后轻相至水处理车间回收处理；

(8)再水洗：在步骤(7)获得的浓缩蛋白液中加入1倍体积量的pH4.5的脱盐水，搅拌10min，在10500rpm条件下进行离心分离，离心后重相为纯净浓缩蛋白溶液，离心后轻相至水处理车间回收处理；

(9)碱溶：根据步骤(8)获得的浓缩蛋白溶液中的粗蛋白含量，确定加入的脱盐水用量，使蛋白溶液浓度达到12.5％，加入质量浓度11％的氢氧化钠溶液，在30rpm条件下搅拌均匀，调节蛋白溶液pH至12，在65℃下保温1.25h，蛋白逐渐溶解，溶液粘度增大，颜色加深，得碱溶蛋白液；

(10)碱溶蛋白液离心、过滤：将步骤(9)获得的碱溶蛋白液在10500rpm条件下进行离心分离，进行连续离心2次，间断排渣，离心后轻相为纯净碱溶蛋白液，过400目滤布过滤，除去不溶解残渣，得用于合成纤维的纤维级蛋白溶液，碱溶蛋白溶液调pH值至12，密闭、室温、避光储存；

所述的步骤(2)、(3)、(5)和(7)中离心所用的离心设备采用高速碟式离心机，喷头口径为1.5mm，进料流量0.5-2m³/h；

所述的步骤(8)和(10)中离心所用的离心设备采用高速碟式离心机，喷头口径为0.5mm，进料流量0.5-2m³/h。