[发明专利]一种抗炎三肽及其提取分离方法和在改善记忆中的应用

说明书

本发明公开了一种抗炎三肽及其提取分离方法和在改善记忆中的应用，该抗炎三肽的氨基酸序列为Leu‑Pro‑Phe，其提取分离方法包括以下步骤：碱溶酸沉从核桃粕中提取核桃蛋白，取核桃蛋白，加去离子水混合，酶解，取上清液，得到核桃蛋白酶解液；使用3kDa分子量超滤膜收集透过液；核桃蛋白酶解液的低分子量组分上样凝胶过滤色谱柱，用去离子水洗脱，检测波长为220nm，收集合并成多个洗脱峰组分，选择抗炎活性较强的组分做质谱检测，证实含有本发明的抗炎三肽。本发明的抗炎三肽对LPS刺激的BV‑2细胞炎症反应具有较好的抑制活性，可用于制备改善记忆类药物或改善记忆类保健品，也可与其他保健品或食品添加剂复配使用。

技术领域

本发明属于活性肽领域，具体涉及一种抗炎三肽及其提取分离方法和在改善记忆中的应用。

背景技术

炎症是机体对外界刺激的一种防御反应，但过度的炎症反应会导致一些与细胞因子大量产生及组织破坏等相关的免疫系统疾病。

神经炎症可引发多种神经退行性疾病，包括阿尔茨海默症(AD)，帕金森病(PD)和多发性硬化症等。小胶质细胞是巨噬细胞样细胞，在中枢神经系统(CNS)的炎症反应过程中发挥关键作用。通常，活化的小胶质细胞伴随形态变化而迁移到特定部位以清除入侵碎片和病原体。另一方面，当小胶质细胞过度活化时，它会释放各种促炎介质，包括一氧化氮(NO)，前列腺素E₂(PGE₂)和促炎细胞因子，例如白介素-1β(IL-1β)，白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及其他一些具有潜在神经毒性的化合物。这些因子在中枢神经系统中的过度产生会触发炎症反应，并最终导致神经变性。重要的是，持续进行性神经炎症会加速脑组织损伤和行为病理学的发展。另外，氧化应激和炎症反应总是相互联系的。活性氧(ROS)通过激活NF-κB途径诱导促炎基因的表达。激活的促炎性转录因子可增强细胞因子和趋化因子的形成，从而引起炎症反应的产生和发展。反之，该过程又会产生更多的ROS。这种恶性循环通过介导线粒体功能障碍，加剧细胞损伤并最终对神经元产生有害影响。这表明氧化应激在神经炎症中的重要作用。

BV-2是一种永生化的小鼠小胶质细胞，由于其激活后可持续、稳定和过量地产生炎性因子，因此被广泛应用于研究炎症相关的神经退行性疾病。

脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌外膜的主要成分，可通过介导多种细胞反应促进炎症因子的释放，通常用于在体内外诱导炎症的发生。

研究表明可通过在小鼠腹膜内注射LPS从而促进炎症反应进程来造成学习和记忆功能障碍模型。

此外，越来越多的研究报道了氧化应激在炎症反应发展中的作用。ROS的产生会增加BV-2小胶质细胞中炎症介质的表达，从而加速神经元损伤和死亡。据报道，小胶质细胞中ROS的过量产生可引起炎症并导致各种类型的神经系统损害。作为细胞中ROS的主要来源，线粒体的功能变化也参与其中。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种抗炎三肽。

本发明的另一目的在于提供上述抗炎三肽的提取分离方法。

本发明的再一目的在于提供上述抗炎三肽的用途。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种抗炎三肽，其氨基酸序列为Leu-Pro-Phe(LPF)。

上述的抗炎三肽可以采用现有技术化学合成。例如通过固相合成仪合成本发明的三肽，将二氯树脂溶胀、洗涤，脱除Fmoc保护基后加入氨基酸进行缩合反应，重复脱除-保护-缩合的过程直至所有氨基酸连接完毕。

此外本发明的抗炎三肽也可采用超滤和葡聚糖凝胶色谱等分离手段从核桃蛋白酶解液中分离获得，具体地包括以下步骤：