[发明专利]一种植物细胞筛选器及筛选同步化植物细胞系的方法

权利要求书

1.一种植物细胞筛选器，其特征在于：配合通气装置使用，包括罐体、补料装置和废液收集装置，罐体内部设有水平的筛网，筛网将罐体内腔分为相连通的第一腔体和第二腔体，第一腔体位于第二腔体上方，第一腔体呈圆柱状，第二腔体呈倒圆锥状，第一腔体上设有接种口、出气口和培养基接口；补料装置和废液收集装置分别通过第一软管和第二软管连通第二腔体的底部，第一软管上设有第一阀门，第二软管上设有第二阀门；第一腔体和第二腔体分别通过第三软管和第四软管连通通气装置，第三软管上设有第三阀门，第四软管上设有第四阀门。

2.根据权利要求1所述的植物细胞筛选器，其特征在于：所述筛网的孔径为3～5mm，孔数为2～4个/cm²。

3.根据权利要求1所述的植物细胞筛选器，其特征在于：所述筛网为聚乙烯、或聚丙烯、或聚碳酸酯材质的筛网。

4.一种筛选同步化植物细胞系的方法，采用权利要求1至3之一所述的植物细胞筛选器，包括如下步骤：

步骤1：将植物细胞种子通过接种口无菌接入事先经过熏蒸灭菌或者辐照灭菌的植物细胞筛选器的罐体，同时将灭菌合格的细胞液体培养基通过培养基接口接入罐体，并控制发酵液液面高于筛网，打开第四阀门且关闭第一阀门、第二阀门和第三阀门，通气装置将无菌空气输入罐体，同时无菌空气通过出气口排出，置于恒温室恒温培养；

步骤2：当培养至在筛网上层形成明显的数厘米厚的细胞团、同时发酵液呈现明显的分层现象时，关闭第四阀门，静置罐体，缓慢打开第二阀门，将下层稀的发酵废液排入废液收集装置中，待罐体内的发酵废液排空后关闭第二阀门；

步骤3：打开第四阀门通入干燥的无菌空气，使细胞层湿度降低，直至肉眼观察上层细胞呈疏松干燥状，关闭第四阀门；

步骤4：打开第一阀门，将补料装置中的营养液缓慢加入罐体，加入到细胞团的下沿位置，自然冷却凝固；

步骤5：打开第三阀门，定期通入无菌空气，使细胞继续生长18-22天，收获上层的细胞即得到均一性、同步化程度高的细胞系。

5.根据权利要求4所述的筛选同步化植物细胞系的方法，其特征在于：所述植物细胞种子为浓粥状人参液体种子，将人参细胞愈伤组织无菌接种于灭菌合格的液体培养基中，置于22-25℃，80-120rpm旋转摇床中震荡培养15-25天而得到。

6.根据权利要求5所述的筛选同步化植物细胞系的方法，其特征在于：步骤1中恒温培养的温度在22-25℃之间，培养至泡沫激增时，进行诱变处理，理化因子为UVB光照、或秋水仙素、或茉莉酸甲酯。

7.根据权利要求4所述的筛选同步化植物细胞系的方法，其特征在于：所述植物细胞种子为浓粥状甘草液体种子，将甘草细胞愈伤组织无菌接种于灭菌合格的MS液体种子培养基中，MS液体种子培养基中添加2,4-D1-2mg/L、NAA0.5-1.0mg/L、IBA1-2mg/L，置于24-26℃，80-120rpm旋转摇床中震荡培养15-25天而得到。

8.根据权利要求7所述的筛选同步化植物细胞系的方法，其特征在于：步骤1中恒温培养的温度在22-25℃之间，培养至泡沫激增时，进行诱变处理，理化因子为甘露糖醇或者茉莉酸甲酯。

9.根据权利要求6或8所述的筛选同步化植物细胞系的方法，其特征在于：泡沫激增时，冰敷罐体降低温度以提高细胞系的同步化水平。

10.根据权利要求4所述的筛选同步化植物细胞系的方法，其特征在于：步骤4中的营养液为含结冷胶的营养液，营养液温度在32℃-37℃之间。