[发明专利]一种大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位突变体

说明书

本发明公开了一种大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)突变体的构建及其在制备粘膜免疫佐剂中的用途。本发明LTB突变体多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明多肽是良好的粘膜免疫佐剂，其粘膜免疫佐剂活性比野生型大肠杆菌不耐热肠毒素LTB高，同时，无毒副作用，安全有效，可以和目前广泛使用的疫苗抗原联合应用，临床应用前景良好。

技术领域

本发明涉及免疫学、预防医学领域，具体涉及一种大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labile enterotoxin B chain，LTB)突变体及其在制备免疫佐剂中的用途。

背景技术

免疫接种(immunization)是用人工方法将免疫原或免疫效应物质输入到机体内，使机体通过人工自动免疫或人工被动免疫的方法获得防治某种传染病的能力。根据接种部位的不同，分为创伤性免疫接种(如注射、划痕等)和无创性接种(如滴鼻、喷雾等)。

粘膜免疫系统(mucosal immune system，MIS)是全身免疫系统的重要组成部分，包括肠粘膜相关淋巴组织、鼻咽粘膜相关淋巴组织、泌尿生殖道粘膜相关淋巴组织等，作为机体免疫屏障的第一道防线，MIS可有效抵抗各种微生物的入侵。与皮下或肌肉注射等创伤性免疫相比，粘膜免疫比传统的免疫方式更具有优势。首先是免疫途径的差异，粘膜免疫主要采用口服、滴鼻或生殖道接种的方法，这种新型的免疫方式可避免针剂对机体刺激，减少针尖对皮肤损伤引起的炎症反应，且可多次重复接种。其次在机体的生殖道、消化道等部位广泛存在有共同粘膜免疫组织，基于此，如果某个部位的粘膜组织发生抗原提呈后产生的免疫反应通常可以刺激诱导较远的粘膜免疫应答。研究发现，粘膜免疫不仅能诱导粘膜组织分泌特异性sIgA中和表面毒素，还能同时诱导体液免疫应答，产生针对抗原的特异性抗体。

目前报道的鼻粘膜免疫的佐剂主要为细菌毒素，如，大肠杆菌不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin，LT)和霍乱毒素(cholera toxin，CT)是有效的粘膜免疫佐剂。但他们存在的毒性限制了临床应用例如，美国于2003年上市的一种流感疫苗以LT为佐剂，接种后中发现其可产生贝尔麻痹等严重副作用而停止使用。

为了避免毒性，人们试图将无毒性的LT的B亚单位(LTB)用做佐剂，但是，由于LTB的佐剂活性不高，只有LT的70％左右，因此，其临床应用收到严重的影响。至今没有LTB用于临床的报道或者案例。

发明内容

为了提高LTB的佐剂活性，满足临床所需，本发明提供了一种大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)突变体(LTB26)其用途。本发明的技术方案包括：

一种大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位突变体，其氨基酸序列如SEQ ID N0：1所示。

前述大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位突变体在制备免疫佐剂中的用途。

前述大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位突变体作为免疫佐剂在制备疫苗中的用途。

如前述的用途，所述疫苗是粘膜接种用疫苗。

如前述的用途，所述疫苗是抗病毒疫苗。

如前述的用途，所述疫苗是以人轮状病毒VP8蛋白(简称VP8)为免疫原的疫苗。

一种免疫佐剂，所述免疫佐剂内含有前述的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位突变体。

一种疫苗，所述疫苗含有免疫原以及免疫佐剂，所述免疫佐剂是如权利要求前述的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位突变体，或前述的免疫佐剂。

如前述的疫苗，所述疫苗是粘膜接种用疫苗。

如前述的疫苗，所述疫苗是抗病毒疫苗。

如前述的疫苗，所述疫苗是以人轮状病毒VP8蛋白为免疫原的疫苗。

本发明具有如下有益效果：