[发明专利]一种检测细菌耐药性的电化学发光生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测细菌耐药性的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：制备NH₂-MIL-53(Al)纳米片；

步骤1.1：将0.7243g 3mmol的AlCl₃·6H₂O溶解于15mL去离子水中；

步骤1.2：在搅拌条件下缓慢加入0.5435g 3mmol 2-氨基-1,4-苯二甲酸，再继续搅拌30分钟，得到混合液1；

步骤1.3：将15mL 6mmol的尿素水溶液逐滴加入到所述混合液1中继续搅拌30分钟，得到混合液2；

步骤1.4：将所述混合液2转移到50mL聚四氟乙烯高压反应釜中,在150℃条件下静置反应5h，得到混合液3；

步骤1.5：将所述混合液3缓慢冷却至室温，抽吸过滤得到乳白微黄色沉淀，并用大量去离子水冲洗干净，得到混合液4；

步骤1.6：将混合液4分散在20mL N,N-二甲基甲酰胺溶液中，室温搅拌24h；

步骤1.7：用等体积的甲醇代替N,N-二甲基甲酰胺溶液，再继续搅拌24小时，反应完成后除去甲醇，在70℃条件下真空干燥过夜，即得到NH₂-MIL-53(Al)纳米片；

步骤2，制备检测细菌耐药性的探针溶液：

用N,N-二甲基甲酰胺溶液配制50μL 100μmol二(2,2'-联吡啶)-4'-甲基-4-羧基联吡啶-钌(N-琥珀亚酰胺酯)-二(六氟磷酸根盐)溶液，加入到缓冲溶液配制的1.5mL 10μmol半刀球蛋白Con A溶液中，在25℃且避光条件下缓慢搅拌6h；其中，所述缓冲溶液为含有1mMCaCl₂,1mM MnCl₂的10mM三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液，所述缓冲溶液PH＝7.4；

步骤3，检测细菌耐药性的电化学发光传感器的组装；

步骤3.1，将步骤1中合成的NH₂-MIL-53(Al)纳米片超声分散在DMF溶液中,将该分散液滴涂到处理干净的工作电极表面，干燥后得到NH₂-MIL-53(Al)/GCE修饰电极；其中修饰到工作电极表面的NH₂-MIL-53(Al)纳米片的分散浓度为0.1-1mg/mL；

步骤3.2，在步骤2所得的探针溶液中加入EDC、NHS进行活化，将步骤3.1所得修饰电极侵入到活化的探针溶液中进行修饰，即可得到Con A-Ru/NH₂-MIL-53(Al)/GCE修饰电极；

步骤3.3，将牛血清蛋白BSA溶于结合缓冲溶液中，滴到步骤3.2所得的Con A-Ru/NH₂-MIL-53(Al)/GCE修饰电极表面进行封闭，即可得到用于检测细菌耐药性的电化学发光生物传感器。

2.根据权利要求1所述的一种检测细菌耐药性的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤3.1中，工作电极为玻碳电极、石墨电极、ITO电极和贵金属电极中的一种。

3.根据权利要求2所述的一种检测细菌耐药性的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3.2中，EDC、NHS的浓度分别为2mg/L和5mg/L,探针溶液Con A-Ru的浓度为0.1-10μM，修饰时间为2-4h。

4.根据权利要求3所述的一种检测细菌耐药性的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3.3中，BSA溶液浓度为0.1-1％，滴到电极表面的体积为10μL，封闭时间为30-60min。

5.一种检测细菌耐药性的电化学发光生物传感器，其特征在于，所述电化学发光生物传感器由权利要求1-4任一所述的制备方法制得。