[发明专利]检测ABCB1和LDLR基因多态性的引物及探针组合物、试剂盒、方法

说明书

本发明涉及检测ABCB1和LDLR基因多态性的引物及探针组合物、试剂盒、方法，该检测ABCB1和LDLR基因多态性的引物及探针组合物包括：用于检测ABCB1位点的第一引物和第一探针；以及，用于检测LDLR位点的第二引物和第二探针；其中，第一引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1‑4所示，第一探针的核苷酸序列如SEQ ID No.9‑10所示；第二引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5‑8所示，第二探针的核苷酸序列如SEQ ID No.11‑12所示。本发明具有检测通量高、操作简便、快速且安全的优点。

技术领域

本发明涉及基因检测技术，特别涉及一种检测ABCB1和LDLR基因多态性的引物及探针组合物、试剂盒、方法。

背景技术

根据我国流行病学调查，中国成人血脂异常总体患病率在2012年高达40.4％，较10年前呈大幅度上升，而血清总胆固醇(TC)水平的升高将导致未来中国心血管病事件增加约920万。低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)或TC升高为特点的血脂异常是动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)重要的危险因素，因此降低LDL-C水平，可显著减少ASCVD的发病及死亡危险。LDL-C每降低1mmol/L(38mg/dL)，患主要心血管事件的风险可降低20％，全因死亡率可降低10％，而非心血管事件引起的死亡率并未增加。

他汀类药物又称为3-羟甲基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMGCo A)还原酶抑制剂，近20多年来的众多大规模临床试验结果显示，他汀类药物在ASCVD一级和二级预防中均能显著降低心血管事件风险，是防治此类疾病最为重要的药物。然而不同的他汀在化学结构上虽有相似之处，但它们在药代动力学(吸收、结合血浆蛋白、代谢和溶解度)与其他药物相互作用、药物疗效以及他汀导致的不良反应方面存在个体间的差异，而这些差异部分是归因于常见药物基因的遗传与变异，ABCB1和LDLR基因则是近年来研究比较多的热点基因。

三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)基因所编码的ABCA1蛋白在胆固醇的逆向转运和机体高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的形成中起到关键作用。当ABCA1基因发生突变时，可影响其蛋白质的转录和翻译，从而影响机体血脂水平。在已发现的ABCB1的将近50个SNP中，2677TG和3435CT均能够影响P-gp的转运底物，导致阿托伐汀疗效的个体化出现差异。相关学者研究发现ABCA1基因多态性与机体血脂异常等疾病存在相关性。

低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor，LDLR)由Brown等发现，认为LDLR与血脂代谢异常密切相关。LDLR基因在人类基因组位于第19号染色体短臂末端(19p13.1～13.3)，在基因组中的长度为45kb，含有18个外显子。LDLR基因突变与血脂异常相关性疾病密切相关，LDLR基因的异常表达可导致低密度脂蛋白胆固醇(low densitylipoprotein-cholesterol，LDL-C)的清除障碍，使LDL-C在血浆中极度升高，导致高胆固醇血症、动脉粥样硬化(atherosclero-sis，AS)等疾病。在药物基因组学权威数据库PharmGKB中显示LDLR基因突变rs1433099(c.666TC)和rs14158(c.52GA)与他汀类的疗效有密切关系。

现有他汀类药物个体化基因检测的方法包括PCR-直接测序法、PCR-基因芯片法和荧光定量PCR法等多种方法，每种方法的原理和优缺点如下：