[发明专利]一种用于检测比格犬封闭群的微卫星标记及其组合

说明书

本发明涉及一种用于检测比格犬封闭群的微卫星标记及其组合。所述微卫星标记包括FH2776、PEZ1、FH3972、C08.618、C14.866、REN06C11、REN85N14、CPH17、PEZ3、FH2626、REN87O21、REN239K24、FH3082、AF85862和PEZ2中的至少一种。

技术领域

本发明涉及一种用于检测比格犬封闭群的微卫星标记，特别是用于检测比格犬封闭群的微卫星标记的组合。

背景技术

比格犬(Beagle)又称米格鲁猎犬或小猎兔犬，原产英国，是猎犬中较小的一种，1880年传入美国，是国际通用的品种犬之一。它具有体型小、性格温顺、反应均一、重复性好、大脑发达和适应性强等优点，非常适合用于生命科学和医学研究，是理想的实验动物，也是国际公认的实验用犬。比格犬在急性毒性试验等药物非临床研究中的应用十分广泛，在使用比格犬复制口腔、泌尿系统疾病的动物模型也有报道。此外，比格犬还可用于遗传学、微生物学和生物学等多个领域的研究。2015年，全国比格犬年用量为1.96万只，占全国实验犬用量的80％。据专家估计，2018年我国比格犬的用量已达到10万余只。虽然比格犬具有对实验反应均一性、重复性和可比性良好等特点，但由于我国早在1983年就正式引进比格犬，经过近30年的繁殖已基本形成适应于国内饲养环境的封闭群，受种群、饲养环境等对方面因素的影响，其遗传信息和生物学特性相比于国外种群也发生了一定程度的变化。面对多地域，多学科，大数量的比格犬市场需求，为了保证比格犬的质量，建立比格犬遗传质量检测方法，进而建立其遗传质量标准已成为比格犬生产质量保障体系的当务之急。

微卫星(Microsatellite)，又称短串联重复(short tandem repeats，STR)，是指以少数几个核苷酸(一般为2至6个)为重复单位组成的简单多次串联重复序列。在真核生物中，微卫星广泛存在于染色体几乎所有区域。微卫星标记按其核心单位的碱基数可分为1、2、3、4、5、6核苷酸微卫星。按微卫星自身结构，Weber将微卫星分为完全、不完全和复合微卫星：完全型微卫星是由不中断的重复单位串联而成；不完全微卫星是指重复单位间有3个以下的非重复碱基间隔，且两间隔间重复单位连续重复数不低于3；复合微卫星是指由几类串联重复单位构成，中间有3个以下碱基间隔，且重复单位连续重复数不低于5。微卫星标记由核心序列和两侧保守的侧翼序列构成，保守的侧翼序列使微卫星特异地定位于染色体某一区域，核心序列重复数的差异则形成微卫星的高度多态性。利用微卫星DNA侧翼序列设计引物进行PCR扩增，由于重复次数的不同形成片段长度不同，经电泳分离，成像表现出不同的电泳带型。

微卫星DNA具有丰富的多态性、遗传连锁不平衡现象、数量多分布均匀、易检测、重复性好、省时，适于自动化分析和在相关物种之间具有保守性等特点而广泛应用于生命科学的研究中。主要表现在以下几个方面：(1)构建基因图谱微卫星是一种共显性标记，其遗传分析过程相对简化，不仅利于作图群体间标记转换，而且也便于从遗传图谱向物理图谱过渡。(2)制作DNA指纹图，微卫星最早应用之一就是制作DNA指纹图来进行个体、品种(系)鉴定。(3)定位功能基因和数量性状基因座(QTL)利用微卫星与某些功能基因或QTL间的连锁关系，可将一些功能基因或QTL定位在染色体上或连锁群中，这方面的研究在家畜(禽)中己有一些利用。(4)进行血缘鉴定和血缘控制，在育种中，系谱记录是十分重要的，最早用于血型和血液蛋白多态性分析，但因多态性不够丰富而让位于DNA指纹技术。(5)用于群体遗传多样性、遗传结构及起源的研究，Nei等(1994)认为，用微卫星估计亲缘关系较近的群体间的遗传距离、绘制系统发育树时，比其它的遗传标记技术更精确和高效。

国际动物遗传学会(ISAG，International Society of Animal Genetics)在2001-2002年首次验证不同微卫星DNA标记在犬亲权鉴定中的有效性及可靠性，并推荐22个位点供作参考使用。然而这些微卫星位点完全不适用于封闭群比格犬遗传质量的检测与监测。

发明内容