[发明专利]一种筛选多氧霉素B组分高产菌株的方法

权利要求书

1.一种筛选多氧霉素B组分高产菌株的方法，其特征在于，包括配制出发菌株孢子悬液，将稀释后的孢子悬液经过先紫外诱变，再日光灯照射，然后ARTP复合诱变后，涂布于培养基平板并培养，将挑出的各单菌落的一半摇瓶考核，选出多氧霉素B组分含量高的菌株。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，将多氧霉素出发菌株金色产色链霉菌接种于斜面培养基恒温培养；

步骤2，挑选步骤1培养好的孢子，加入生理盐水，梯度稀释，涂布于斜面培养基平板上，恒温培养后长出单菌落；

步骤3，挑选步骤2饱满合格的单菌落，均匀切开，其中一半用于制作诱变的孢子悬液，另外一半用于摇瓶考核对照；

步骤4，将步骤3切下的半个单菌落加入含甘油的生理盐水，振荡分散制成待诱变孢子悬液；

步骤5，步骤4制成的待诱变孢子悬液滴入ARTP诱变育种仪的载片上，均匀涂开；

步骤6，将滴加到载片的悬液先紫外诱变，再日光灯照射，然后ARTP诱变，得到诱变液；

步骤7，用无菌生理盐水洗下步骤6所述的诱变液；

步骤8，保持黑暗或在红光下，将步骤7所述的诱变液用生理盐水梯度稀释，分别涂布于斜面培养基平板上，恒温培养；

步骤9，挑选步骤8培养突变的若干单菌落，切下所选这些单菌落的一半接种到摇瓶种子培养基，恒温振荡培养，其余半个仍要保留；将步骤3剩余的半个单菌落也接种到摇瓶种子培养基，恒温振荡培养；

步骤10，将步骤9培养的摇瓶种子以5-15%的接种量接种到摇瓶发酵培养基中继续恒温振荡培养；

步骤11，对步骤10的各发酵瓶发酵液中多氧霉素B组分含量进行检测，筛选与出发菌株单菌落比较代谢B组分含量提高的菌株。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤1、2中，培养参数为温度25-28℃培养5-8天。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以质量百分含量计，所述步骤1、2、8中所述的斜面培养基包括以下成份：玉米粉0.2-0.7%、麦芽糖0.2-0.8%、酵母膏0.3-0.6%、琼脂1.5-2.5%，其余是蒸馏水，所述的斜面培养基的消前pH为7.0-7.2。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4中，所述的生理盐水为含20wt%甘油的生理盐水。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤6中，紫外诱变的参数为：15W紫光灯距离悬液30cm，照射5-60秒；日光照射的参数为：日光灯照射3分钟；ARTP诱变的参数为：照射功率120W，氦气流量8-12SLM，照射10-180秒。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤8中，所述的培养为于温度25-27℃在暗处培养6-14天。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤9中，所述的培养为在28℃、转速220rpm恒温摇床培养28-32小时；所述步骤10中，所述的培养为在28℃、转速220rpm恒温摇床培养130-140小时。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤9中，以质量百分含量计，所述的摇瓶种子培养基包括以下成份：玉米粉1.0-2.0%、低温黄豆饼粉1-4%、啤酒酵母粉0.1-1.0%、果葡糖浆0.5-1.5%、NaCl 0.1-0.3%、CaCO₃ 0.2-0.4%、KH₂PO₄ 0.05-0.20%，自来水配制，所述的摇瓶种子培养基的消前pH为6.5-6.8。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤10中，以质量百分含量计，所述的摇瓶发酵培养基包括以下成份：玉米粉8-10%、低温黄豆饼粉2.0-3.0%、啤酒酵母粉0.3-0.5%、鱼粉0.4-0.8%、NaCl 0.1-0.5%、CaCO₃ 0.1-0.5%、KH₂PO₄ 0.05-0.20%、α-淀粉酶为玉米粉质量的0.005-0.020%，自来水配制，所述摇瓶发酵培养基的pH值为消前6.5-6.8。