[发明专利]副溶血弧菌的快速恒温检测方法、引物组及应用有效
| 申请号： | 202010042450.2 | 申请日： | 2016-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN111057781B | 公开（公告）日： | 2022-07-26 |
| 发明（设计）人： | 曹永梅;李园园;李雪玲;韦朝春;贾犇;刘伟;陆长德;李亦学 | 申请（专利权）人： | 上海旺旺食品集团有限公司;上海产业技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63 |
| 代理公司： | 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257 | 代理人： | 董红曼 |
| 地址： | 201103 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 溶血 弧菌 快速 恒温 检测 方法 引物 应用 | ||
1.一种非诊断目的的针对副溶血弧菌的恒温检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）从待测样品中提取基因组DNA；
（2）以所述基因组DNA为模板，以能扩增副溶血弧菌基因组特异性碱基序列的引物组作为引物，在酶反应体系下进行恒温扩增反应；
（3）通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在副溶血弧菌；
其中，所述副溶血弧菌基因组特异性碱基序列为GI号为28899855的副溶血弧菌基因组的22268～23012 bp位序列；
其中，所述能扩增副溶血弧菌基因组特异性碱基序列的引物组为引物组B或引物组B’；
引物组B：
上游外引物F3_B：5’- TGGAAAGAATATACAGTCGC -3’（SEQ ID NO：5）；
下游外引物B3_B：5’- GGTAATTGTGATCACGCTT -3’（SEQ ID NO：6）；
上游内引物FIP_B：5’- GGCAAATCGATTGAATTTTGCCGGTTAGATTCATAGAGACTTCC -3’（SEQID NO：7）；
下游内引物BIP_B：5’- GCAGATTAACCGACTTAGTAGGATGTTAATACGCTCGCGATA -3’（SEQ IDNO：8）；
引物组B’：
上游外引物F3_B：5’- TGGAAAGAATATACAGTCGC -3’；
下游外引物B3_B：5’- GGTAATTGTGATCACGCTT -3’；
上游内引物FIP_B：5’- GGCAAATCGATTGAATTTTGCCGGTTAGATTCATAGAGACTTCC -3’；
下游内引物BIP_B：5’- GCAGATTAACCGACTTAGTAGGATGTTAATACGCTCGCGATA -3’；
下游环引物LB_B：5’- AGAAGTACTGGAAATGCACGAT -3’（SEQ ID NO：18）。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述酶反应体系包括：1× BstDNA聚合酶反应缓冲液，2-9mmol/L Mg2+，1.0-1.6mmol/L dNTP，0.8-2.0µmol/L的FIP和BIP引物，0.15-0.3µmol/L的F3和B3引物，0.16-0.64U/μL Bst DNA聚合酶，0-1.5mol/L的甜菜碱，包括或不包括0.4-1.0µmol/L的LB引物。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述恒温扩增反应的反应程序为：① 60～65℃孵育10～90min；② 80℃终止反应2～20min。
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