[发明专利]唐古特虎耳草中天然自由基清除剂的分离工艺及其应用

说明书

本发明涉及唐古特虎耳草中天然自由基清除剂分离技术领域，具体涉及唐古特虎耳草中天然自由基清除剂的分离工艺及其应用。其制备方法：提取、微孔树脂柱粗分、在线自由基清除剂组分筛选、反相制备柱制备、Fr1‑1的反相制备液相色谱纯化及Fr1‑3的亲水/反相二维液相色谱纯化六个步骤。本发明成本低廉、产品纯度大于95%；本发明采用的技术手段可进行规模化生产：原料要求不高、成本低廉，易于批量备料；甲醇室温冷浸提取，易于操作；分离采用微孔树脂柱粗分，该微孔树脂分离材料可以装于中压柱层析系统中，易于规模化；分离纯化中使用的反相制备液相色谱或亲水制备液相色谱，为快速的等度方法。

技术领域

本发明涉及唐古特虎耳草中天然自由基清除剂分离技术领域，具体涉及唐古特虎耳草中天然自由基清除剂的分离工艺及其应用。

背景技术

唐古特虎耳草（Saxifraga tangutica Engl.），别名甘青虎耳草，是虎耳草科（Saxifragaceae）虎耳草属（Saxifraga）的一年生常绿草本植物，藏药名：“松吉蒂”，中药中称之为“迭达”，主要分布在青海、甘肃、西藏、四川以及及不丹与克什米尔地区海拔2900~4900米的针叶林灌丛下。唐古特虎耳草为常用藏药，可全草入药，《中药辞海》记载：其性味微苦、辛、寒。主要功效：清肝利胆，补脾健胃。主治：肝炎，胆囊炎，流行性感冒。现代药理学研究证明酚类是主要活性成分。文献报道，酚类化合物具有良好的清除自由基活性。但目前仅有本课题发表的8个抗氧化的酚类化合物从唐古特虎耳草中被分离并鉴定（Jun Dang,Yanduo Tao, Yun Shao, et al. Antioxidative extracts and phenols isolated fromQinghai-Tibet Plateau medicinal plant Saxifraga tangutica Engl. IndustrialCrops and Products, 2015, 78: 13-18）。为了进一步加快唐古特虎耳草的质量评价、生产销售及相关新药的研发步伐，有必要从中挖掘更多的活性成分。

目前，有关唐古特虎耳草中天然自由基清除剂的分离制备工艺及其应用并未见文献报道，已有的研究也未做到系统化的研究。因此，亟需建立一种工艺简单、规模化从唐古特虎耳草中分离制备天然自由基清除剂的方法。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于提供唐古特虎耳草中天然自由基清除剂的分离工艺及其应用。

唐古特虎耳草中天然自由基清除剂的分离工艺，该方法具体包括如下步骤：

步骤1，提取：将唐古特虎耳草全草阴干，粗碎后按料液比1g：5~100mL的甲醇提取，在室温下提取2~4次，每次2~4 h，过滤、合并滤液，即滤液A，该滤液A按聚酰胺的量：唐古特虎耳草药材的量=1:5拌样并减压干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌样样品；

步骤2，微孔树脂柱粗分：唐古特虎耳草提取物拌样样品，该样品经装有微孔树脂的中压色谱塔分离，经检测波长为254 nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第一个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得目标组分；

步骤3，在线自由基清除剂组分筛选：在所述唐古特虎耳草含有目标成分的组分中加入其质量5~10倍的体积浓度为70~90%的甲醇进行溶解，配制样品浓度为50.0~100.0 mg/mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤，得到唐古特虎耳草甲醇样品溶液，即滤液B，取1mL滤液B，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统筛选唐古特虎耳草含有目标成分的组分中自由基清除剂；