[发明专利]一种小鼠干眼动物模型及其应用

说明书

本发明提供一种稳定的干眼动物模型，是通过敲除动物中AQP5基因来构建干眼动物模型；所述的敲除AQP5基因，是敲除小鼠第15条染色体上的99589876‑99594444区域的核苷酸片段。本发明所提供的干眼小鼠模型应用于筛选或评价干眼治疗药物的效果。本发明的AQP5^‑/‑模型小鼠，可重复性高，模型稳定，有利于干眼病理机制的研究和药物干预，可避免其他影响因素对实验结果产生影响。而且本发明的AQP5^‑/‑小鼠模型，在出生后即出现泪液分泌减少的特征性改变，在出生后，眶外泪腺就出现空泡变性的病理学特征；且泪液分泌量随年龄增长无明显变化，并且无性别差异。

技术领域

本发明属于医用动物模型技术领域，具体涉及一种干眼动物模型的建立方法。

背景技术

干眼是指由于泪液质和量及动力学的异常而导致泪膜不稳定和/或眼表面的异常，并伴有眼部不适症状的一类疾病。是眼科最常见的疾病之一，可引起眼表损伤和视力模糊等，而影响到患者的生活质量。

干眼可以分为蒸发过强型干眼、水液缺乏型干眼、粘蛋白异常型干眼、泪液动力学异常型干眼及混合型干眼。临床调查显示，干眼是目前常见的眼表疾病，并可继发引起角膜炎、角膜新生血管以及角膜溃疡等，严重影响人们的生活质量和工作效率。干眼发病的共同病理生理特征有眼表上皮屏障破坏、泪液减少、结膜杯状细胞减少、眼表上皮鳞状上皮化生等。由于干眼发病机制复杂且具有多样性，目前关于干眼的发病机制、诊断和治疗的一系列基础以及临床问题尚有待进一步深入研究。

动物模型的建立是研究干眼的发病机制，探索治疗方法的有效且实用的手段。目前已经报道的干眼动物模型的建立方法包括：通过营养因素、环境因素、毒性物质、药物作用、改变动物性激素分泌水平、去除泪腺或眼表的神经支配、诱导泪腺产生自身免疫反应、手术摘除泪腺以及转基因动物等。这些干眼动物模型的建立往往需要较高的技术条件或较长的时间，并且变异性较大。

发明内容

本发明的目的在于克服现有模型种类的不足，提供一种稳定的干眼动物模型，从而弥补现有技术的不足。

申请人采用CRISPR/Cas9技术，设计sgRNA，应用高通量电转受精卵方式，获得AQP5基因敲除小鼠(AQP5^-/-)。并且首次证明AQP5^-/-小鼠，出生后即表现为干眼，模型的表型稳定，并且无性别差异，从而促成了本发明。

本发明首先提供一种干眼动物模型的构建方法，是通过敲除动物中AQP5基因来构建干眼动物模型；

所述的敲除动物中AQP5基因，是通过CRISPR/Cas9系统来进行的；

本发明还提供一种干眼小鼠模型，是通过上述的方法敲除AQP5基因来构建的；

所述的敲除AQP5基因，是敲除小鼠第15条染色体上的99589876-99594444区域，长度为4569bp的核苷酸片段；

本发明还提供一种用于检测AQP5^-/-小鼠的制品，所述的制品中包含有用于检测上述缺失片段的引物对；

其中用于检测上述缺失片段的引物对，其一种序列信息如下：AQP5-F1:CAAAGTGCTCAAACACTAACCGTAC(SEQ ID NO:1)AQP5-R1:GATTGGTGGTTTATTGGGAAACG(SEQ IDNO:2)。AQP5-R3:TGCAGGTCTTTGTTTCTGCCG(SEQ ID NO:3)。

本发明所提供的干眼小鼠模型应用于筛选或评价干眼治疗药物的效果。