[发明专利]改性环氧树脂固定化酶、制备方法及应用

权利要求书

1.一种改性环氧树脂固定化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将环氧树脂进行改性，向改性环氧树脂中加入聚乙烯亚胺进行进一步修饰，然后加入待固定的酶和戊二醛进行固定得到所述改性环氧树脂固定化酶。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将环氧树脂进行改性包括采用高碘酸钠氧化环氧树脂或使用亚氨基二乙酸与环氧树脂进行反应。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，当所述将环氧树脂进行改性为采用高碘酸钠氧化环氧树脂时，在加入高碘酸钠前先用乙酸处理所述环氧树脂，在加入待固定的酶和戊二醛进行固定后还包括添加交联剂戊二醛或葡聚糖醛进行二次交联的步骤。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，当所述将环氧树脂进行改性为使用亚氨基二乙酸与环氧树脂进行反应时，在向改性环氧树脂中加入聚乙烯亚胺进行进一步修饰后，还包括加入金属离子溶液进行处理的步骤，且所述待固定的酶具有his标签；

优选地，所述金属离子溶液选自氯化钴、硫酸钴、氯化镍、硫酸铜、氯化亚铁、硫酸亚铁中的一种或多种；

优选地，所述金属离子溶液的浓度为5～100mmol/L，优选为10～50mmol/L。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述待固定的酶和戊二醛的加入顺序依次为所述待固定的酶、戊二醛或戊二醛、所述待固定的酶。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，向改性环氧树脂中加入聚乙烯亚胺进行进一步修饰的步骤中还包括辅助因子的加入，所述辅助因子为NAD+、NADP+或PLP；

优选的，所述聚乙烯亚胺以聚乙烯亚胺水溶液的形式参与反应，所述辅助因子在所述聚乙烯亚胺水溶液中的终浓度为1～10mg/mL，优选为3～6mg/mL；

优选的，所述交联剂戊二醛或葡聚糖醛在使用之前还包括用PEG修饰交联剂的步骤，所述PEG修饰所述交联剂戊二醛或葡聚糖醛包括将交联剂用水溶解，再加入PEG，20～30℃搅拌1～6h，PEG选自PEG400～PEG2000,PEG与交联剂的质量比为1：1～10：1，进一步优选为2：1～4：1。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述乙酸处理环氧树脂中，采用的乙酸为乙酸溶液，所述乙酸溶液中乙酸的浓度为0.5～3M，优选为1～2M；所述乙酸溶液与所述环氧树脂的体积质量比为5～20：1，优选为10～15：1；

优选地，所述采用高碘酸钠氧化环氧树脂时所采用的高碘酸钠溶液中高碘酸钠的浓度为50～500mM，优选为100～200mM；所述高碘酸钠溶液与环氧树脂的体积质量比为5～20：1，优选为5～15：1；

优选地，所述聚乙烯亚胺的分子量为3KDa～70KDa，所述聚乙烯亚胺水溶液的浓度为0.5％～3％，优选为1％～2％；所述聚乙烯亚胺水溶液的pH为6～11，进一步优选为7～10；

优选地，交联剂戊二醛或葡聚糖醛的体积/质量终浓度为0.1％～3％，优选为0.3％～2％；

优选地，酶与所述改性环氧树脂的质量比为0.05～0.3：1；

优选地，所述使用亚氨基二乙酸与环氧树脂进行反应中亚氨基二乙酸采用的是亚氨基二乙酸水溶液，所述亚氨基二乙酸水溶液的浓度为0.5～3M，优选为1～2M，所述亚氨基二乙酸水溶液与环氧树脂的体积质量比为5～20：1，优选为10～15：1；所述亚氨基二乙酸水溶液的pH为6.0～10.0，优选为7.0～9.0。