[发明专利]一种藏药十八味诃子利尿丸的应用及其对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用的试验方法

说明书

本发明提供一种藏药十八味诃子利尿丸的应用及其对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用方法。通过高海拔地区糖尿病脑病模型的实际造模操作，本发明提供一种老药新用途径。藏药十八味诃子利尿丸药物，在临床上用于对糖尿病、肾病、尿频、腰肾疼痛等病症，但本发明发现可对糖尿病脑病也起一定的保护作用。

技术领域

本发明属于医学药物领域，涉及一种藏药十八味诃子利尿丸对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用方法。

背景技术

藏药十八味诃子利尿丸为传统藏药制剂，处方源自《藏医医诀补遗》，收载于《卫生部药品标准》1995年版藏药第一册中，是以诃子(去核)、红花、豆蔻、余甘子、姜黄、小檗皮、蒺藜、金门石、刺柏、刀豆、熊胆、人工牛黄等十八味药制成的复方制剂。临床上主要应用于糖尿病、肾病、尿频、腰肾疼痛等症。中藏药多组分、多靶点作用方式，是其区别于西药的特色和优势所在。但是，也正是由于这种作用的复杂性，给中藏药的研究带来了巨大的困难。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明提供了一种藏药十八味诃子利尿丸对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用方法。

本发明提供了一种藏药十八味诃子利尿丸对2型糖尿病脑病大鼠的脑保护作用方法，包括以下步骤：

步骤1，选取SPF级SD雄性大鼠，4周龄，体重为80-100g,使用普通饲料适应性喂养1周后，采用高脂饲料联合链脲佐菌素造模，模拟2型糖尿病脑病并发症动物模型；将大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组；其中正常对照组给予普通饲料喂养，糖尿病脑病组给予高脂饲料喂养，喂养持续14周；

步骤2，将糖尿病脑病组大鼠禁食10-12h,按照STZ总剂量为20mg/kg 进行尾静脉注射，正常对照组给予相同剂量的杅檬酸钠缓冲液。STZ注射1周后，尾静脉检测大鼠随机血糖，血糖≥16.7mmol/L判断糖尿病造模成功；

步骤3，继续饲养6周后通过Mirros水迷宫实验筛选2型糖尿病脑病大鼠：前4d为训练，每天下午训练4次，每只大鼠每次训练2min，将大鼠面向池壁随机从4个入水点放入水中，记录从入水到找到站台所用的时间作为测试成绩；如果大鼠在2min内未找到平台，逃避潜伏期计为2min，并由实验者将其牵引至平台上，停留30s后，放回笼中休息30min之后，开始下一次测试；第5天为测试期，记录逃避潜伏期；

步骤4，同正常对照组比较，逃避潜伏期明显延长，且出现认知功能减退的视为2型糖尿病脑病大鼠；将筛选出的2型糖尿病脑病大鼠随机分为糖尿病脑病组及藏药组；

步骤5，开始灌胃：灌胃周期为4周，灌胃方法为隔天灌胃，灌胃前禁食(不禁水)4-6h；藏药十八味诃子利尿丸灌胃剂量为350mg/kg,溶于3ml生理盐水；灌胃4周后，再次行Mirros水迷宫实验，实验步骤同步骤3，记录逃避潜伏期；

步骤6，处死取大鼠脑部海马组织；

步骤7，Fluo-jade-c染色分析海马神经元退行性变化；Western blots检测海马NF-κB水平；

步骤8，统计分析。

STZ即链脲佐菌素。

优选的，步骤1中的普通饲料组分为：小麦10份，麸子30份，玉米面30 份，豆饼20份，鱼粉5份，骨粉2份，酵母2份和食盐1份。

优选的，步骤2中的高脂饲料组分为：小麦10份，麸子30份，玉米面30 份，豆饼20份，鱼粉5份，骨粉2份，酵母2份，食盐1份，猪油5份、酥油 5份、蔗糖10份、胆固醇2.5份、胆酸钠1份。

优选的，高脂喂养14周，行糖耐量、胰岛素耐量试验，建立胰岛素抵抗模型后给予小剂量STZ尾静脉注射。

优选的，糖尿病模型成模标准：(1)STZ注射前存在胰岛素抵抗；(2)STZ 注射1周后，随机血糖≥16.7mmol/L。