[发明专利]曲霉WBX-38及其在生产环匹阿尼酸中的应用

说明书

本发明公开了一种曲霉WBX‑38及其在生产环匹阿尼酸中的应用，将曲霉WBX‑38和肺冢村氏菌TP‑B0596分别进行发酵培养，将发酵液混合，在25‑32℃、160‑200rpm条件下共培养5‑8d，将共培养液分离纯化，获得环匹阿尼酸。本发明曲霉WBX‑38与肺冢村氏菌TP‑B0596共培养，制备得到环匹阿尼酸化合物，产量为20mg/L。

技术领域

本发明涉及一种环匹阿尼酸的制备方法，特别涉及一种海洋来源曲霉(Aspergillus sp.)WBX-38与细菌(Tsukamurellapulmonis)TP-B0596共培养生产环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid)的方法，本发明属于微生物发酵技术领域。

背景技术

自然界可以生产大量新颖和不寻常的分子骨架，其创造力是无与伦比的。在天然产物中，微生物次级代谢产物又是一个非常重要的组成部分，相当数量的天然产物药物或其先导物都是由微生物或微生物与宿主的相互作用产生的。开启抗生素时代的青霉素，后续的大环内酯类抗生素红霉素，都是由微生物生产的。但近些年，随着研究的深入，在微生物次级代谢产物中发现众多具有价值的化合物的同时，筛选获得的微生物资源的重复率不断上升，发现具有新结构、新活性化合物的几率逐年下降。

在实验室培养条件下，微生物的次级代谢产物产生途径不被表达或抑制。针对这一困境，科学研究者们提出了一系列的解决方案，其中一种策略就是共培养，模拟自然环境中微生物之间，微生物与环境之间的相互作用，促进微生物生长。在自然界中，不同的微生物群形成了复杂的微生物群落。因此，科学工作者们普遍认为，相较于纯培养，共培养可以更有效地产生次生代谢产物，因为两种不同的微生物共培养能够更好地模拟自然环境中微生物之间的不断相互作用。

发明内容

本发明的目的是提供一株新菌株--海洋曲霉WBX-38，以及利用海洋来源曲霉WBX-38与细菌TP-B0596共同发酵培养在生产环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid)中的应用，解决了环匹阿尼酸化合物生产的需求问题。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一株新菌株，曲霉(Aspergillus sp.)WBX-38，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCCNo：3.676，保藏日期为：2019年12月13日，地址广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮编510070。

本发明还提供一种所述曲霉WBX-38在生产环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid)中的应用，所述的应用方法为：将曲霉WBX-38和肺冢村氏菌(Tsukamurellapulmonis)TP-B0596分别进行发酵培养，将发酵液混合，在25-32℃、160-200rpm条件下共培养5-8d，将共培养液分离纯化，获得环匹阿尼酸。

进一步，所述曲霉WBX-38发酵培养条件为：将曲霉WBX-38接种至PDB培养基中，在25-32℃、160-200rpm条件下振荡培养1-3d(优选30℃、180rpm培养2d)，获得曲霉WBX-38发酵液；所述PDB培养基组成：200g/L马铃薯，20g/L葡萄糖，溶剂为水，pH自然。

进一步，所述肺冢村氏菌TP-B0596发酵培养条件为：将肺冢村氏菌TP-B0596接种至细菌培养基，在25-32℃、160-200rpm条件下振荡培养1-3d(优选30℃、180rpm培养2d)，获得肺冢村氏菌TP-B0596发酵液；所述细菌培养基组成为：20g/L淀粉、20g/L甘油、5g/L葡萄糖、15g/L酪蛋白胨、3g/L酵母提取物，溶剂为水，pH自然。

进一步，所述曲霉WBX-38在发酵前先接种至PDA培养基，30℃培养5d，得到曲霉WBX-38菌株平板，再将曲霉WBX-38菌株平板接种至PDB培养基进行发酵；PDA平板培养基组成：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然。