[发明专利]假结核耶尔森氏菌的快速恒温检测方法、引物组及试剂盒

说明书

本发明公开了一种针对假结核耶尔森氏菌的快速恒温检测方法、引物组及试剂盒。所述方法为：从待测样品中提取基因组DNA；以所述基因组DNA为模板，以能扩增假结核耶尔森氏菌特异性序列的引物组为引物，在酶反应体系下进行恒温扩增反应；通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在假结核耶尔森氏菌。本发明检测方法具有高灵敏度和高特异性，检测时间短，结果判定简单，操作便捷，成本低，具广泛应用前景。

本申请是2016年8月30日提交的、申请号为201610780457.8、发明名称为：“快速恒温检测假结核耶尔森氏菌的方法、引物及试剂盒”的中国发明专利申请的分案申请；该母案申请要求申请日为2015年9月2日、申请号为201510556917.4、发明名称为“快速恒温检测阪崎克罗诺杆菌的方法、引物及试剂盒”的中国发明专利申请的优先权。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速恒温检测假结核耶尔森氏菌的方法、引物及试剂盒。

背景技术

假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)属于肠杆菌科耶尔森氏菌属，是一种人畜共患的肠道病原菌，该菌可在低温环境下生存，因此冰箱储存食物是现代社会发生该菌感染的一个重要传染源，可引起胃肠道症状、肠系膜淋巴结炎等。该菌感染在人群中以散发为主，偶尔也会引起不同规模的暴发。由于其临床症状不典型，极易造成诊断不明甚至误诊而延误治疗。因此，对于该菌的预防和检测非常重要。

传统假结核耶尔森氏菌检测方法由于检测周期较长，操作相对复杂，检测效率较低，难以满足现代社会对于食源性致病菌检测过程高通量、高灵敏度、高特异性、快速、便捷的要求。近年来随着核酸分子检测技术的发展，研究人员也开发出了PCR等检测手段，但是该方法需要专门的检测仪器，因此，并不适合广泛应用于基层检测部门尤其是企业生产线内部进行的实时实地检测。为了确保食品安全，急需快速、简单、准确的方法来检测食品中的假结核耶尔森氏菌。

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年来发展起来的一种新型恒温核酸扩增方法，该法针对靶序列的6个区域设计4条特异性引物(包括上下游外引物F3和B3以及上下游内引物FIP和BIP，其中FIP由F1C和F2组成，BIP由B1C和B2组成)，利用一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在恒温条件保温约60min，即可完成核酸扩增反应，产生肉眼可见的反应副产物-白色焦磷酸镁沉淀(见文献Notomi T,OkayamaH,Masubuchi H,Yonekawa T,Watanabe K,Amino N,Hase T.Loop-mediated isothermalamplification of DNA,Nucleic Acids Research,2000Jun 15；28(12):E63)。该技术具有不需要PCR仪或荧光定量PCR仪、恒温下即可完成，肉眼即可判断反应结果，以及灵敏度高、特异性强、反应时间短、操作便捷、成本低等优点。