[发明专利]一种芍药属植物根尖染色体制片的方法

说明书

本发明涉及植物的染色体制片方法，具体涉及一种芍药属植物根尖染色体制片的方法，与现有技术的区别在于，根尖取材范围扩大到芍药组和牡丹组内植物，解离步骤是将固定后的材料放入无水乙醇与37％盐酸体积比为3:1的解离液中，室温下解离；还增加蒸馏水中低渗步骤。本发明取材于大田中的芍药和牡丹实生苗，特殊的解离步骤，一方面降低了实验所需的条件，更便于实验进行；另一方面适当地提升了盐酸浓度，不仅降低了细胞壁和细胞质对制片结果的影响，同时也防止在高温酸性条件下，染色体的断裂分解；解离后低渗使得染色体分散良好，计数方便，背景干净。

技术领域

本发明涉及植物的染色体制片方法，具体涉及一种芍药属植物根尖染色体制片的方法。

背景技术

芍药属系芍药科植物的灌木或草本，分为三个组：牡丹组、芍药组和北美芍药组，其中北美芍药组仅有两种，分布在北美西部；芍药组系属内最大的组，为草本类型，分布在亚欧大陆，牡丹组为木本类型，为我国特有种。该属植物多具有鲜艳的花朵，其中牡丹花和芍药花分别被冠以“花王”和“花相”，都是中国栽培历史悠久的传统名花，素有“花中二绝”的美誉。因其花色富丽，花型妩媚，被广泛应用于园林和庭院栽种。

染色体核型分析是细胞分类学的重要指标，对于研究植物的起源和进化、物种之间的亲缘关系以及种间杂种鉴定等都很有价值。植物染色体制片是进行核型分析、带型分析和染色体原位杂交等细胞遗传学研究的基础。近年来随着细胞遗传学研究在植物分类和育种中的应用，染色体制片技术尤为重要。芍药染色体属于大型染色体，长度约10～20μm，染色体基数为5。在芍药属的三个组里，牡丹组所有种的染色体数目均为二倍体(2n＝2x＝10)，芍药组内存在着二倍体(2n＝2x＝10)和四倍体(2n＝4x＝20)的分化。分析其染色体大小、数量、形态特征、核不对称系数，在一定范围能反映芍药属品种群演化和种间亲缘关系，可为杂交育种和新品种选育提供细胞学基础。

因此，如果能找到芍药属植物根尖染色体制片的最佳技术方法，有利于对芍药属染色体进行深入研究，对芍药属植物的起源进化、品种分类、不同倍性品种杂交后代的倍性鉴定等研究也具有十分重要的理论和实践意义。

过去在芍药属植物染色体制片中，取材主要通过沙藏种子生根，由于种子纯合性较难保证，故无法取得准确的原种染色体信息。有些方法在植株上取新根，但预处理试剂多具有毒性，价格较贵或难获得，并且处理时间较长。常规解离阶段多用酶解法或用1mol/L盐酸在60℃处理，制片步骤复杂且需要特定条件。

中国专利申请201811625900.X提出了一种芍药染色体的全年制片方法，针对芍药全年范围内分生能力强的组织，均可实现成功的制片，而且还可以根据时间直接选取芍药不同分生组织或者间接通过对芍药不同器官进行处理后所获得的分生组织作为染色体制片材料，可获得较多分裂相、分散良好、清晰的染色体图像。但是该方法的取材范围较窄，只进行了芍药根尖染色体制片，该专利中的解离步骤与正常解离步骤相似，需在55～65℃下进行，制片条件要求较高，整个步骤过程用时较长，并且在常规根尖染色体制片的过程中细胞壁和细胞质对制片结果的影响较大，而且在高温酸性条件下，良好的分裂相数量少且染色体易断裂分解，影响核型分析结果。

发明内容

本发明为了克服上述技术问题，提供了一种适合大田生长的芍药属植物根尖染色体的制片方法，不仅操作简单方便，制片成本低廉，用时较短而且得出的染色体分散均匀，背景干净，易于观察。

解决上述技术问题的技术方案如下：

一种芍药属植物根尖染色体制片的方法，包括以下步骤：

(1)取材：取大田中生长健壮的芍药属植物实生苗的白色根尖，置于盛有清水的容器中，作为制片的材料备用；取材是在上午9点到11点挖取实生苗；

白色根尖为1～1.5cm。