[发明专利]一种用于诱导产生瓜氨酸化TRIM28特异性抗体的疫苗

说明书

本发明公开了一种用于诱导产生瓜氨酸化TRIM28特异性抗体的疫苗。该疫苗包括包括与载体蛋白连接的短肽，以及其可接受的佐剂；该短肽的氨基酸序列为：PYSSAEPHVSGMKCitSCitSG EVC。本发明设计的如SEQ ID NO.1所示的抗原短肽，能够得到TRIM28‑Cit抗体，其能够特异性的、且高灵明度的识别到细胞内的TRIM28‑Cit蛋白，从而使得本发明设计的抗原短肽能够区分出TRIM28和TRIM28‑Cit蛋白表达差异。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种用于诱导产生瓜氨酸化TRIM28特异性抗体的疫苗。

背景技术

TRIM28也被称为KRAB(Kruppel-associated box)相关蛋白1或者转录中介因子1β。可以帮助维持胚胎干细胞固有的分化潜能，并且抑制体细胞的重编程能力。正肽基精氨酸脱亚胺酶4(peptidylarginine deiminase 4,PADI4)是一种瓜氨酸化酶，可以将蛋白多肽中的精氨酸残基催化成瓜氨酸，瓜氨酸化后的蛋白其分子构象和生物活性均发生改变。在已识别的PADI4底物中，发现Atrx，Dnmt3b，TRIM28和接头组蛋白Histone H1的变体等底物均可能影响干细胞的多能性。TRIM28的核心部分由PxVxL五肽结构域和转录中介因子信号序列(TIF1 signature sequence，TSS)组成，前者可以与异染色质蛋白(heterochromatin protein 1，HP1)相互作用。TRIM28的羧基端包含2个结构域，分别是植物同源结构域(plant homeodomain，PHD)和溴结构域(bromodomain)，其中PHD区域可以招募核小体重塑脱乙酰酶(nucleosome remodeling deacetylase，NuRD)、组蛋白脱乙酰酶复合物和组蛋白H3K9特异甲基转移酶(SET domain bifurcated 1，SETDB1)，从而发挥染色质凝缩作用。多潜能细胞具有疏松的染色质结构，TRIM28的470和472位的精氨酸可以被PADI4瓜氨酸化，这提示我们干细胞的多能性与TRIM28瓜氨酸化有关。关于TRIM28非组蛋白瓜氨酸化的研究还存在许多空白，原因在于瓜氨酸与精氨酸结构差异很小，很难制备特异性识别的TRIM28瓜氨酸化的抗体。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种用于诱导产生瓜氨酸化TRIM28特异性抗体的疫苗，

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种用于诱导产生瓜氨酸化TRIM28特异性抗体的疫苗，包括与载体蛋白连接的短肽，以及其可接受的佐剂；

该短肽的氨基酸序列为：PYSSAEPHVSGMKCit(瓜氨酸)SCit(瓜氨酸)SGEVC。

进一步地，佐剂为弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂。

进一步地，载体蛋白为BSA。

进一步地，短肽与载体蛋白连接的连接过程如下：

将短肽溶解于载体蛋白溶液中，加入戊二醛溶液，室温搅拌4～6h后，加入反应终止剂终止反应，静置后于4～6℃取上清，并将其与缓冲液混合，透析70～90h即可；

短肽与载体蛋白的重量比为0.05～0.1:0.5～1。

进一步地，反应终止剂为甘氨酸。

进一步地，短肽与载体蛋白的重量比为0.05:1。

包含上述短肽的细胞系。

本发明的有益效果为：

通过本发明设计的抗原短肽，能够得到TRIM28-Cit抗体，其能够特异性的、且高灵明度的识别到细胞内的TRIM28-Cit蛋白，从而使得本发明设计的抗原短肽能够区分出TRIM28和TRIM28-Cit蛋白表达差异。

附图说明