[发明专利]一种布鲁氏菌抗体凝胶检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种布鲁氏菌抗体凝胶检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有内置有检测试剂卡的检测试剂卡盒、布鲁氏菌抗原试剂瓶、阳性质控试剂瓶、阴性质控试剂瓶、稀释液试剂瓶、倍比稀释板，所述检测试剂卡内装有微球凝胶和抗人球蛋白抗体AHG。与现有技术相比，本发明的布鲁氏菌抗体凝胶试剂监测盒中的抗人球蛋白微球凝胶法解决了SAT和RB法不能检出不完全抗体的不足，同时又避免了Coombs法多次洗涤和离心的繁琐，判读结果客观可标准化，不受操作者技能的影响，本发明布鲁氏菌抗体凝胶试剂监测盒可以在1个小时内检测出待检血清中是否存在布鲁氏菌抗体，进而判断是否有布鲁氏菌感染，这又是免疫捕捉凝集法所达不到的。

技术领域

本发明涉及布鲁氏菌病快速检测技术领域，特别是一种布鲁氏菌抗体凝胶检测试剂盒。

背景技术

布鲁氏菌病是一种人畜共患的传染性疾病，在1860年由David Bruce最先确认其发病原因，并以此命名。人们通过直接接触牛、羊、猪和骆驼等患病动物的血液、胎盘、胚胎或者子宫分泌物，或者人们食用带有布鲁氏菌病菌动物的制品（特别是末经高温消毒的牛奶或者奶制品）而被感染布鲁氏菌病。布鲁氏菌病的发病区域主要集中在地中海、中东、阿拉伯半岛、墨西哥、美国的中部和南部和南亚次大陆，布鲁氏菌病会给发病区域造成巨大的经济损失，同时对公众的健康也有严重的威胁。伤寒、单核白血球增多症、利什曼原虫症和结核病这些病和布鲁氏菌病的病症相似，并且布鲁氏菌病缺乏一些典型的症状，使得布鲁氏菌病诊断困难。

在布鲁氏菌病发病的进程中，血清中有三类抗体，分别是IgM、IgA和IgG。在1967年Coghlan等人通过蔗糖密度梯度分离的方法，检测一系列周期内病人的血清，发现在布鲁氏菌病急性期，血清里面有IgM和IgG完全抗体，在慢性期中，血清中主要是IgG不完全抗体。在1967年Kerrt等人确认在布鲁氏菌病慢性期内，血清中还含有不完全抗体IgA。IgM抗体是完全抗体，IgM抗体很容易和抗原结合形成可见凝集物。IgA、IgG是不完全抗体，IgA和IgG不完全抗体与抗原结合不能形成可见的凝集物，但是加入抗人球蛋白抗体（AHG）后，就可以形成可见凝集块。

诊断布鲁氏菌病主要是检测血清中的抗体，方法主要包括：虎红平板（RB）凝集法、标准凝集试管（SAT）法、间接抗人球法（Indirect Coombs）以及免疫捕捉凝集（Immunocapture-agglutination）法。

虎红平板凝集法的原理是：在PH=3.65的缓冲条件下，血清与被虎红染色的布氏菌悬浮液混合在一起时，当血清中有抗体时，便发生凝集反应。这种方法简单并且快速，对于急性病的病人可以在5到10分钟内给出相当好的结果。但是由于它只能检出完全抗体，所以当病人是布鲁氏菌病的慢性期，虎红平板凝集法会得出很高比例假阴性的结果，造成漏检。

标准凝集试管（SAT）法是在试管中进行的，在试管中按比例加入布氏菌悬浮液和倍比稀释的血清，血清的稀释比例为1：20到1：1280，然后在37℃水浴中孵育24小时，通过肉眼观察试管底部的凝集。

但是对于患有慢性期布鲁氏菌病、再次感染或者复发的病人来说，RB和SAT方法就很难检测出这些病人。在这些条件下，免疫反应是由IgG不完全抗体占主导，不完全抗体限制了RB和SAT方法的敏感性，所以在血清检测中使用这二种方法往往得到阴性结果。

Coombs法是在SAT法的基础上产生的，Coombs法可以用来检测IgG不完全抗体，但是此方法需要多次手工离心和洗涤，并且结果判读受检测者主观的影响，容易出现漏检与误检。

免疫捕捉凝集（immunocapture-agglutination）法是在Coombs法基础上发展而来的，该方法可以用来IgG和IgA不完全抗体，并且与Coombs法有相似的敏感性和特异性。这方法的优点是容易操作，不需要洗涤和离心的步骤，缺点是该方法需要在24小时后得到结果。

发明内容