[发明专利]用于H7N9亚型禽流感病毒HA多肽竞争抑制ELISA抗体检测的单克隆抗体及方法

说明书

本发明属于免疫领域，涉及一种用于H7N9亚型禽流感病毒HA多肽竞争抑制ELISA抗体检测的单克隆抗体及方法。本发明公开了H7‑12多肽抗体单克隆抗体杂交瘤细胞株3G10(CCTCC No：C2019150)及其在H7N9亚型禽流感病毒HA多肽的竞争抑制ELISA抗体检测中的应用。本发明利用筛选到的单抗3G10作为竞争抗体建立一种竞争抑制ELISA方法，用来检测H7N9病毒感染血清抗体；因为H7N9灭活标记疫苗所产生的抗体中没有针对H7‑12的抗体，所以该方法又能作为标记疫苗配套的检测方法，用于区分临床上H7N9亚型AIV野毒感染血清和标记疫苗免疫血清，为H7N9亚型AIV的净化提供了技术支持。

技术领域

本发明属于免疫领域，具体涉及一种基于H7N9亚型禽流感病毒HA多肽的竞争抑制ELISA抗体检测方法。

背景技术

目前禽流感抗体检测的常用方法主要包括血凝抑制(HI)试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)。HI试验检测对象为阻断HA蛋白与受体结合的功能性抗体，而基于HA、NP、M或NS1蛋白的ELISA方法可以检测所有目的蛋白的抗体，在保留不同蛋白特异性的同时具有更高的灵敏性、良好的重复性、高通量、高效率、操作方便快捷，而且价格低廉等诸多优点，故大多数的DIVA疫苗均采用该技术作为配套的检测方法。

H7N9亚型禽流感是目前严重危害养禽业的疫病之一,并可引起人的感染和死亡,因此在公共卫生上也具有重要意义。为了从源头上消灭H7N9亚型禽流感，目前我国已开始在家禽使用H7N9亚型灭活疫苗并取得了良好的控制效果。为了评价H7N9亚型禽流感疫苗免疫的抗体水平，或未免疫禽群是否存在H7N9亚型禽流感病毒感染抗体，必须建立起H7N9亚型禽流感特异性抗体检测方法。目前禽流感抗体的检测方法很多,包括血凝抑制试验(HI),酶联免疫吸附试验(ELISA),琼脂扩散试验(AGID),免疫荧光试验和胶体金免疫层析技术，其中ELISA方法具有高灵敏性、良好的重复性、高通量、高效率、操作方便快捷的特点，在抗体检测方面应用广泛。

而基于HA、NP、M或NS1蛋白的ELISA方法可以检测所有目的蛋白的抗体，在保留不同蛋白特异性的同时，而且价格低廉等诸多优点，故大多数的DIVA疫苗均采用该技术作为配套的检测方法。

在前期工作中，我们研制的H7N9亚型AIV灭活标记疫苗，其配套的检测方法为多肽芯片检测技术，虽然该方法有较好的灵敏度和特异性，但多肽芯片相对成本较高，且需要特定的仪器和设备，故不适合临床上大量样品的检测。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种区分H7N9亚型AI野毒感染血清和标记疫苗免疫血清的方法。是以H7-12肽制备单克隆抗体，经生物学特性鉴定后筛选出可用于竞争抑制ELISA的单克隆抗体，利用该酶标抗体建立竞争抑制ELISA，并进行优化和验证，利用于临床血清样品的检测，区分疫苗免疫的动物还是野毒株感染的动物，技术路线如图1所示。

本发明公开了H7-12多肽抗体单克隆抗体杂交瘤细胞株3G10，其保藏编号是CCTCCNo：C2019150。

本发明还公开了所述的H7-12多肽抗体单克隆抗体杂交瘤细胞株3G10在H7N9亚型禽流感病毒HA多肽的竞争抑制ELISA抗体检测中的应用。

本发明进一步提供了一种基于H7N9亚型禽流感病毒HA多肽的竞争抑制ELISA抗体检测方法，是以H7-12多肽抗体单克隆抗体杂交瘤细胞株3G10分泌的单克隆抗体为酶标抗体，建立竞争抑制ELISA，进行临床血清样品的检测，区分疫苗免疫与野毒株感染的样品。

本发明利用筛选到的单抗3G10作为竞争抗体建立一种竞争抑制ELISA方法，用来检测H7N9病毒感染血清抗体；因为H7N9灭活标记疫苗所产生的抗体中没有针对H7-12的抗体，所以该方法又能作为标记疫苗配套的检测方法，用于区分临床上H7N9亚型AIV野毒感染血清和标记疫苗免疫血清，为H7N9亚型AIV的净化提供了技术支持。

附图说明