[发明专利]一次性检测肺癌多重基因突变的组合物及其应用

权利要求书

1.一种用于检测肺癌多重基因突变的组合物，其特征在于，该组合物由下表所示的281条序列的引物和探针组成，且该281条序列用两支PCR 8联管分组分装如下：

。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的引物和探针的反应体系，包括：

(1)逆转录反应体系：纯化水5～25μL、5×逆转录缓冲液5～15μL、各引物20～150μmol、逆转录酶100～200U，总体积为20～30μL；

(2)PCR反应体系：纯化水15～45μL、10×PCR缓冲液5～15μL、MgCl₂ 1～10mmol、各对引物1～20pmol、各对探针1～20pmol、dNTPs10～100pmol、Taq酶1～10U，总体积为30～50μL。

3.一种试剂盒，包括权利要求1中所述的281条序列的引物和探针。

4.根据权利要求3所述的一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括两种PCR 8联管，该两种PCR 8联管分别检测肺癌RNA基因融合和肺癌DNA基因突变。

5.根据权利要求3或4所述的一种试剂盒，其特征在于，所述PCR 8联管中检测肺癌RNA基因融合的检测试剂包括：ALK、NTRK1、NTRK2和NTRK3融合基因检测试剂各1管，ROS1融合基因检测试剂2管，MET 14号外显子跳跃基因突变检测试剂1管，RET融合基因检测试剂1管。

6.根据权利要求3或4所述的一种试剂盒，其特征在于，所述PCR 8联管中检测肺癌DNA基因突变的检测试剂包括：EGFR、EGFR、EGFR、EGFR/BRAF、EGFR/KRAS、HER2/KRAS、HER2/KRAS突变基因检测试剂各1管，外控检测试剂1管。

7.权利要求3至6中任一权利要求所述的一种试剂盒的非诊断目的的使用方法，其特征在于，

包括：

(1)提取检测样本中的DNA和RNA，所述检测样本包括新鲜病理组织、石蜡包埋组织或石蜡切片组织；

(2)将所述RNA与逆转录酶混合，分别加入逆转录反应液，得到cDNA；

(3)将所述DNA和所述cDNA分别与混合酶混合，并加入到PCR 8联管；

(4)经荧光PCR扩增仪扩增后，根据显示的Ct值判断检测结果。