[发明专利]一种检测空肠弯曲菌的引物组合和试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测空肠弯曲菌的引物组合和试剂盒，属于生物检测技术领域，包括外部引物和内部引物；所述外部引物包括上游外部引物和下游外部引物，所述上游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述内部引物包括上游内部引物和下游内部引物，所述上游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述下游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。采用本发明提供的引物组合对空肠弯曲菌具有高度的特异性，结合环介导等温扩增方法能够缩短检测的时间，灵敏度达到20pg/μl。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种检测空肠弯曲菌的引物组合和试剂盒。

背景技术

目前在实验室多采用细菌培养和核酸检测作为主要的空肠弯曲菌检测方法。细菌培养法费时费力；普通PCR虽灵敏度高于细菌培养法，但检测样本易污染；荧光定量PCR法虽可实现对微量病原核酸样本精准实时检测，但需昂贵的实验设备和经验丰富的实验人员，很难满足快速检测的要求。因此，对空肠弯曲菌的快速、准确地检测具有非常重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测空肠弯曲菌的引物组合和试剂盒，采用本发明提供的引物组合对空肠弯曲菌具有高度的特异性，结合环介导等温扩增方法能够缩短检测的时间。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种检测空肠弯曲菌的引物组合，包括外部引物和内部引物；所述外部引物包括上游外部引物和下游外部引物，所述上游外部引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述内部引物包括上游内部引物和下游内部引物，所述上游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述下游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

本发明还提供了一种试剂盒，包括上述技术方案所述的引物组合、、核酸扩增反应酶、核酸扩增缓冲液和扩增显色剂。

优选的，所述核酸扩增反应酶包括Bst DNA聚合酶。

优选的，所述Bst DNA聚合酶的酶活为5U～15U。

优选的，所述核酸扩增缓冲液包括20mM Tris-HCl、10mM(NH₄)₂SO₄、50mM KCl、24mMMgSO₄、0.1％Tween 20、1mM dNTP，所述核酸扩增缓冲液的pH值为8.8。

优选的，所述扩增显色剂包括SYBR Green I。

本发明提供了一种检测空肠弯曲菌的引物组合，包括外部引物和内部引物；所述外部引物包括上游外部引物和下游外部引物，所述上游外部引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述内部引物包括上游内部引物和下游内部引物，所述上游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述下游内部引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。采用本发明提供的引物组合对空肠弯曲菌具有高度的特异性，结合环介导等温扩增方法能够缩短检测的时间，灵敏度达到20pg/μl。

附图说明

图1为核酸样本用四条引物进行反应结果；

图2为核酸样本稀释后的反应结果。

具体实施方式