[发明专利]一种利用响应面法复合酶优化绿茶茶多酚的提取工艺

权利要求书

1.一种利用响应面法复合酶优化绿茶茶多酚的提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：

(1)材料准备

a.选取干净茶叶，经过高温杀青，晾干粉碎过40目筛，制得茶粉末，冷藏备用；

(2)茶多酚含量的测定

a.准确称取没食子酸标准品0.110g,置于100mL容量瓶中，以去离子水溶解，定容后得到没食子酸标准储备溶液；

b.准确吸取上述没食子酸标准储备溶液0.0、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL分别置100mL容量瓶中，分别以水定容至刻度，摇匀，使其浓度分别为0、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的没食子酸溶液；

c.分别取上述不同浓度的没食子酸溶液各1mL移到试管中，分别加入5mL的福林酚试剂，摇匀，反应3～8min；

d.将步骤c中的溶液分别加入4.0mL质量分数75g/L的碳酸钠溶液，摇匀，室温静置60min；

e.将步骤d中的混合溶液在波长765nm处测定吸光度，以没食子酸含量(Y)和吸光度(X)进行线性回归，得标准曲线方程：Y＝0.0129X+0.0844，R²＝0.9996；

f.茶多酚得率的计算公式为：

(3)单因素实验

a.准确称取茶粉末1.000g，并以70％乙醇溶液为溶剂混合；

b.用不同的纤维素酶、果胶酶、溶剂浓度、液料比、提取温度、提取时间、PH值进行水浴浸提单因素试验；

c.每个单因素设5个不同处理水平，每个处理做3个平行，求平均值为茶多酚含量；

(4)响应面分析法优化茶多酚提取工艺

a.在单因素实验的基础上，选取影响较大的四个单因素作为响应变量，运用desingexpert8.0.6软件进行Box-Behnken Design(BBD)实验设计；

b.每个因素设3个处理水平，每个处理做3个平行，进一步优化提取条件，得到提取绿茶茶多酚的最佳工艺条件。

2.根据权利要求1所述的一种利用响应面法复合酶优化绿茶茶多酚的提取工艺，其特征在于：所述步骤(1)中的茶叶为西藏林芝地区波密县易贡茶场茶树老叶。

3.根据权利要求1所述的一种利用响应面法复合酶优化绿茶茶多酚的提取工艺，其特征在于：所述步骤(2)中茶多酚得率的计算公式中：c_TP：茶多酚含量(％)；A：样品测试液吸光度；A₀：试剂空白液吸光度；SLOPE_Std：没食子酸标准曲线的斜率；m：样品质量(g)；V：样品提取液体积(mL)；D：稀释因子(通常为1mL稀释成100mL,则其稀释因子为100)；ω：样品干物质含量(％)。

4.根据权利要求1所述的一种利用响应面法复合酶优化绿茶茶多酚的提取工艺，其特征在于：所述步骤(3)中纤维素酶的用量为：2、4、6、8、10mg/g，果胶酶用量为：2、4、6、8、10mg/g，溶剂浓度为：20、40、60、80、100％，料液比为1:10、1:20、1:30、1:40、1:50g/mL，提取温度为：30、45、60、75、90℃，提取时间为：30、70、110、150、190min，PH值为：3、4、5、6、7。

5.根据权利要求1所述的一种利用响应面法复合酶优化绿茶茶多酚的提取工艺，其特征在于：所述步骤(4)中选取的四个单因素为溶剂浓度、料液比、提取温度和提取时间。