[发明专利]一种纯化PCR产物的方法有效
| 申请号: | 202010012956.9 | 申请日: | 2014-11-26 |
| 公开(公告)号: | CN111118125B | 公开(公告)日: | 2023-06-30 |
| 发明(设计)人: | 周小川;朱奇;张小林;盛苨晶 | 申请(专利权)人: | 杭州联川基因诊断技术有限公司 |
| 主分类号: | C12Q1/686 | 分类号: | C12Q1/686 |
| 代理公司: | 杭州信与义专利代理有限公司 33450 | 代理人: | 万景旺 |
| 地址: | 310018 浙江省杭州市杭*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 纯化 pcr 产物 方法 | ||
1.一种纯化PCR产物的方法,包括向PCR反应混合物添加下列成分,包括靶序列,第一通用引物和第二通用引物,DNA片段,聚合酶、PCR缓冲液,其中靶序列侧翼有与第一通用引物和第二通用引物相同或者互补的引发区段,不包含引发区段的片段、以及第二通用引物包括引发区段、修饰基因区段和标记区段;探针接枝珠,其中探针有与标记区段基本上互补的序列,在杂交缓冲液中获得探针与标记区段之间的稳定杂交,再将珠放在洗脱缓冲液中,以从珠释放PCR产物,
其中,杂交温度低于洗脱温度,杂交温度在杂交缓冲液中探针/标记对的Tm以下,洗脱温度在洗脱缓冲液中的探针/标记对的Tm以上,杂交缓冲液的盐浓度至少为50mM,洗脱缓冲液的盐浓度至多为100mM。
2.如权利要求1所述的方法,其中修饰基因区段选自下列组:一个或多个C3烷基间隔区,一个或多个乙二醇间隔区,一个或多个光裂解的间隔区,一个或多个1',2'-二脱氧核糖、一个或多个脱氧尿苷或它们的组合。
3.如权利要求1所述的方法,其中标记区段至少包括一个结合部分。
4.如权利要求3所述的方法,其中结合部分是生物素。
5.如权利要求1所述的方法,其中标记区段包括寡核苷酸和结合部分。
6.如权利要求3所述的方法,其中结合部分是连接到标记区段寡核苷酸的5'端。
7.如权利要求1所述的方法,其中通用引物有尾区段和通用区段。
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