[发明专利]使用微生物裂解反应来削减剩余污泥中多种抗生素抗性基因丰度和限制其水平转移的方法

权利要求书

1.一种使用微生物裂解反应来削减剩余污泥中多种抗生素抗性基因丰度和限制其水平转移的方法，其特征在于，所述方法包括具体如下：

步骤一：噬菌型微生物发酵剂的制备，所述噬菌型微生物发酵剂包括蛭弧菌、黄色黏球菌、酵母菌和放线菌，所述噬菌型微生物发酵剂的活菌数10⁸～10¹⁰cfu/g，其中蛭弧菌菌株命名为SDWB01，已于2016年5月12号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11671，其余菌株均购自《中国微生物菌种保藏中心》，将培养好的蛭弧菌、黄色黏球菌、酵母菌和放线菌菌液复配后离心，取菌泥与保护剂和吸附载体混合制得噬菌型微生物发酵剂；

步骤二：将噬菌型微生物发酵剂直接投入待处理的剩余污泥中，持续进行曝气和搅拌，进行生物裂解反应；

所述蛭弧菌的活菌数为5.6×10¹⁰～7.8×10¹⁰cfu/g，所述黄色黏球菌的活菌数为1.6×10¹⁰～2.3×10¹⁰cfu/g，所述酵母菌的活菌数为2.6×10⁹～5.3×10⁹cfu/g，所述放线菌的活菌数为5.7×10⁸～6.8×10⁸cfu/g；

步骤一：噬菌型微生物发酵剂的制备，具体如下：

步骤1：菌种培养：分别将蛭弧菌、黄色黏球菌、酵母菌和放线菌接种于灭菌后的独立培养基中培养，分别获得蛭弧菌菌液、黄色黏球菌菌液、酵母菌菌液和放线菌菌液；

步骤2：菌液复配；分别取步骤1中制备得到的蛭弧菌菌液、黄色黏球菌菌液、酵母菌菌液和放线菌菌液，并将上述菌液混合均匀，经离心处理后取沉淀的菌泥；

步骤3：吸附烘干：先向混合机中依次加入保护剂和步骤2中制备得到的菌泥，所述保护剂：步骤2中制备得到的菌泥的质量比为(3-8)：1，混合均匀制得第一混合物；

然后再向第一混合物中加入吸附载体继续混合，所述第一混合物，吸附载体的重量比为1:10，混合均匀制得第二混合物，将第二混合物烘干处理后得到噬菌型微生物发酵剂；

所述吸附载体由稻草秸秆粉和丝兰提取物混合制成，所述吸附载体中稻草秸秆粉和丝兰提取物的重量比为(10-20)：1。

2.根据权利要求1所述的使用微生物裂解反应来削减剩余污泥中多种抗生素抗性基因丰度和限制其水平转移的方法，其特征在于，步骤1中所述培养基的组分为：营养肉汤体积比6.5×10^-5，营养盐(Ca²⁺、Mg²⁺)体积比4‰，pH为7.2-7.4。

3.根据权利要求1所述的使用微生物裂解反应来削减剩余污泥中多种抗生素抗性基因丰度和限制其水平转移的方法，其特征在于：步骤2中分别取得的各菌液所占体积比为：蛭弧菌菌液60％～80％、黄色黏球菌菌液15％～20％、酵母菌菌液5％～10％和放线菌菌液5％～10％。

4.根据权利要求1所述的使用微生物裂解反应来削减剩余污泥中多种抗生素抗性基因丰度和限制其水平转移的方法，其特征在于：步骤2中所述离心处理过程的参数为：离心转速3500～5000r/min，离心时间5～10min。

5.根据权利要求1所述的使用微生物裂解反应来削减剩余污泥中多种抗生素抗性基因丰度和限制其水平转移的方法，其特征在于，其特征在于：步骤3中所述烘干的温度为30～35℃，烘干时间为5～8小时。

6.根据权利要求1所述的使用微生物裂解反应来削减剩余污泥中多种抗生素抗性基因丰度和限制其水平转移的方法，其特征在于：步骤3中所述保护剂的组分为：海藻糖质量比2％、脱脂奶粉质量比3％、谷氨酸钠质量比4％和91％水。