[发明专利]一种鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体提取及冻干粉制备方法

权利要求书

1.一种鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体提取方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：

步骤1，收集鳄鱼脂肪干细胞；

步骤2，对步骤1收集到的鳄鱼脂肪干细胞在无血清培养基中进行培养，取上清液超高速离心，沉淀物即为鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体。

2.根据权利要求1所述的鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体提取方法，其特征在于，步骤2中将收集到的鳄鱼脂肪干细胞在无血清培养基中进行培养，具体方法为：将鳄鱼脂肪干细胞加入到无血清培养基中，培养5～8天，每天收集上清液，并更换新鲜的培养基。

3.根据权利要求1或2所述的鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体提取方法，其特征在于，步骤2中超高速离心的具体步骤为：

a.将经过无血清培养基培养收集的上清液在4～6℃下，以300～400g离心10～15min，留上清液，弃去沉淀；

b.将a步骤所得上清液在4～6℃下，以1800～2500g离心10～20min，留上清液，弃去沉淀；

c.将b步骤所得上清液在4～6℃下，以10000～12000g离心25～30min，留上清液，弃去沉淀；

d.将c步骤所得上清液在4～6℃下，以100000～150000g离心65～75min，弃去上清液，保留沉淀；

e.将d步骤所得沉淀采用PBS缓冲溶液进行重悬，然后再在4～6℃下，以100000～150000g离心65～75min，弃去上清液，保留沉淀，即得鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体。

4.一种权利要求1-3任一项所述的鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，向鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体中加入冻干赋形剂，然后依次经过冷藏和两次冷冻干燥，即得。

5.根据权利要求4所述的鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述冻干赋形剂的添加量为每1mg鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体中添加0.03～0.05mg冻干赋形剂。

6.根据权利要求5所述的鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述冻干赋形剂为甘露醇或麦芽糊精。

7.根据权利要求6所述的鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述冷藏温度为5～10℃，冷藏时间为20～30min。

8.根据权利要求4-7任一项所述的鳄鱼脂肪干细胞来源外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，所述两次冷冻干燥相关参数为：

第一次冷冻干燥：温度-40～-50℃，时间4～8h；

第二次冷冻干燥：温度-35～-45℃，时间15～25h。