[发明专利]一种细胞冻存液

说明书

本发明涉及一种细胞冻存液。具体地，本发明提供一种细胞冻存液，所述的细胞冻存液包括DMSO、胎牛血清和DMEM MD210原倍液；所述的DMEM MD210原倍液包括DMEM MD210粉末和水。本发明所述的细胞冻存液能够提高冻存的细胞密度，降低细胞冻存所需要贮存容器的体积，且能够在液氮或超低温条件下长时间储存，冻存细胞复苏和传代后具有良好的细胞活力和产毒效果，有利于工业化转产。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种细胞冻存液。

背景技术

细胞是疫苗生产不可或缺的原料，这是由病毒的基本特性决定的：离开了细胞，病毒不能进行完整的新陈代谢，因此，良好畅通的细胞供应以及细胞状态是保证疫苗生产顺利进行的基石。为了保持细胞的生物活性，又能控制在合适的代次内用于生产，疫苗生产企业常常用超低温保存的方法来冻存细胞，在液氮的超低温(-196℃)下，细胞处于休眠状态，这时候的细胞新陈代谢基本停止，当迅速恢复到合适的温度以及生长条件时又能进行传代扩大培养，是目前最理想的、可行的细胞保存方法。目前细胞保种常用方法有：

1.常规冻存管冻存：装量5ml，存放于液氮中；

2.常规冻存袋冻存：装量150ml，存放于-80℃冰箱中；

常规冻存管冻存常常采用5ml的冻存管冻存，然而，由于现有的常规冻存管中冻存的细胞密度较低，复苏一支冻存管至一个T75克瓶中，且扩大到2个静止的1.5万毫升血清瓶中常常需要高达10天的时间，较长的放大时间限制了细胞的应用，因此，为了加快所需放大的细胞生产，往往需要多个冻存管进行复苏生产，然而，多个冻存管的使用导致操作繁琐复杂，增大冻存空间且细胞批间差异性增大等缺点。虽然现有技术尝试提高冻存管中冻存的细胞密度，但难以保证冻存细胞复苏及其传代后仍然具有良好的细胞活力。

与冻存管相比，冻存袋虽然能够提高细胞的数量，克服常规冻存管冻存量小、操作复杂等缺点，缩短细胞复苏后生长时间，但由于冻存袋体积(每袋150ml，相当于30个5ml的冻存管)过大，不适合液氮罐存放且冻存袋放于液氮中容易炸裂，只能冻存于-80℃冰箱，然而，在-80℃存储条件下，细胞保存时间显著低于液氮保存，因此，与液氮保存的冻存管相比，冻存袋的保存期显著缩短。

因此，本领域需要开发一种冻存方法，提高冻存的细胞密度，缩小冻存容器的体积，便于保存至液氮或超低温环境中，且保证细胞复苏后具有良好的细胞活力和产毒效果，便于细胞放大生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够提高冻存的细胞密度，降低细胞冻存所需要贮存容器的体积，且能够在液氮或超低温条件下长时间储存，冻存细胞复苏和传代后具有良好的细胞活力和产毒效果的细胞冻存液。

本发明的第一方面，提供一种细胞冻存液，所述的细胞冻存液包括DMSO、胎牛血清和DMEM MD210原倍液；

所述的DMEM MD210原倍液包括DMEM MD210粉末和水。

在另一优选例中，所述的DMEM MD210粉末来源于北京清大天一科技有限公司。

在另一优选例中，在所述的DMEM MD210原倍液中，所述DMEM MD210粉末的含量为2-50g/L，较佳地4-30g/L，更佳地5-25g/L，更佳地5-20g/L，更佳地8-20g/L，最佳地佳地10-16g/L。

在另一优选例中，所述的DMSO、胎牛血清和DMEM MD210原倍液的体积比(v/v/v)为(0.5-1.5):(1-15):(1-15)，较佳地(0.5-1.5):(1-10):(1-10)，更佳地(0.5-1.5):(1-8):(1-8)，更佳地(0.5-1.5):(2.5-6.5):(2.5-6.5)，更佳地(0.8-1.2):(2.5-6.5):(2.5-6.5)，更佳地(0.5-1.5):(3-6):(3-6)，更佳地(0.8-1.2):(3-6):(3-6)，最佳地(0.8-1.2):(4-5):(4-5)。