[发明专利]一种用于弧菌检测的比率型电化学传感平台及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于弧菌检测的比率型电化学传感平台，包括工作电极和设置在所述工作电极表面的修饰层，所述修饰层包括设置在所述工作电极表面的酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物层、沉积在所述酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物层表面的金纳米颗粒层和固定在所述金纳米颗粒层表面的探针DNA，所述探针DNA为弧菌的特异性靶DNA序列的互补序列，所述探针DNA的3’端和5’端分别修饰有二茂铁和巯基；

所述酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物为酚醛树脂球和Cu²⁺经螯合反应得到的多配位螯合物，所述酚醛树脂球具有孔道结构和螯合功能基团；

所述孔道结构的孔径小于3 nm；

所述酚醛树脂球的制备方法包括以下步骤：

提供3-氨基酚溶液，所述3-氨基酚溶液中的溶剂为乙醇和水的混合溶剂，所述3-氨基酚溶液的浓度为0.1mol/L，所述乙醇和水的体积比为1:2.5；

将氨水溶液加入所述3-氨基酚溶液中混合并搅拌，得到碱性氨基酚溶液，所述氨水溶液中氨水的质量浓度为28%，所述氨水溶液与所述3-氨基酚溶液的体积比为1:150，所述搅拌的时间为10分钟，所述搅拌的温度为30℃；

将甲醛溶液加入所述碱性氨基酚溶液中混合并搅拌，进行缩合反应，得到缩合反应料液，所述甲醛溶液中甲醛的质量百分数为37%，所述甲醛溶液与碱性氨基酚溶液的体积比为1:135，所述缩合反应的时间为4小时，所述缩合反应的温度为30℃；

将所述缩合反应料液进行离心，清洗所述离心得到的沉淀，得到酚醛树脂球，所述离心的转速为4500rmp，所述离心的时间为40分钟；

所述酚醛树脂球与Cu²⁺的螯合反应，包括以下步骤：

提供酚醛树脂球水分散液，所述酚醛树脂球水分散液的质量浓度为0.5 mg/mL；

将所述酚醛树脂球水分散液与氯化铜水溶液混合，进行螯合反应，得到螯合反应液，所述氯化铜水溶液的摩尔浓度为200mmol/L，所述酚醛树脂球水分散液与氯化铜水溶液的体积比为1:1，所述螯合反应在室温条件下进行，所述螯合反应在搅拌的条件下进行，所述搅拌的速率为500转/分钟，所述螯合反应的时间为4小时；

将所述螯合反应液离心，冲洗所述离心得到的沉淀，对所述冲洗后的沉淀再次离心，得到酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物，所述离心的条件为10000rmp。

2.权利要求1所述比率型电化学传感平台的制备方法，包括以下步骤：

提供酚醛树脂球水分散液，所述酚醛树脂球水分散液的质量浓度为0.5 mg/mL；

将所述树脂球水分散液与氯化铜水溶液混合进行螯合反应，得到螯合反应液，所述氯化铜水溶液的摩尔浓度为200mmol/L，所述酚醛树脂球水分散液与氯化铜水溶液的体积比为1:1，所述螯合反应在室温条件下进行，所述螯合反应在搅拌的条件下进行，所述搅拌的速率为500转/分钟，所述螯合反应的时间为4小时；

将所述螯合反应液离心，冲洗所述离心得到的沉淀，对所述冲洗后的沉淀再次离心，得到酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物，所述离心的条件为10000rmp；

将所述酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物分散在水中，得到酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物分散液；

将所述酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物分散液滴涂到工作电极表面，得到螯合物修饰工作电极；

将所述螯合物修饰工作电极置于氯金酸溶液中，与参比电极和对电极组成三电极体系，进行电沉积，在所述酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物表面形成金纳米颗粒层，得到纳米金/螯合物修饰工作电极；

在所述纳米金/螯合物修饰工作电极表面固定探针DNA，所述探针DNA为弧菌的特异性靶DNA序列的互补序列，所述探针DNA的3’端和5’端分别修饰有二茂铁和巯基，所述探针DNA通过Au-S键固定在所述纳米金/螯合物修饰工作电极表面，得到用于弧菌检测的比率型电化学传感平台。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述酚醛树脂球-Cu²⁺螯合物分散液的质量浓度为0.1 ~ 5.0 mg/mL。