[发明专利]制备普卡那肽的改进方法

权利要求书

1.一种制备普卡那肽的方法，其包括以下步骤：

(a)使用合适的试剂使式(I)的直链H₂N-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-OH单环化，以获得式(VI)的单环肽，

(b)使用反相柱色谱纯化步骤(a)中获得的式(VI)的单环肽，

(c)使用合适的试剂使步骤(b)中获得的式(VI)的单环肽双环化，以获得式(VII)的双环肽

和

(d)使用反相柱色谱将步骤(c)中得到的式(VII)的双环肽纯化并脱盐，以获得纯的普卡那肽。

2.如权利要求1所述的制备普卡那肽的方法，其中，步骤(a)中的式(I)的直链是通过包括以下步骤的方法获得的：

(a)使用偶联试剂将片段A与王树脂结合的片段B偶联以获得王树脂结合的受保护的肽片段；

(b)使用试剂三氟乙酸/三异丙基硅烷/DODT/水将步骤(a)中获得的所述王树脂结合的受保护的肽片段切割和脱保护，以获得式(I)的直链，H₂N-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-OH。

3.如权利要求1所述的制备普卡那肽的方法，其中，用于纯化单环肽的反相柱色谱具有：柱规格：250×80mm，介质规格：C-18，10μ，100A°，流动相A：0.02M三乙基磷酸铵的水溶液，pH 6.5，和流动相B：乙腈。

4.如权利要求1所述的制备普卡那肽的方法，其中，用于纯化式(VII)的双环肽的反相柱色谱具有：柱规格：250×80mm，介质规格：C-18，7μ～10μ，100A°，流动相A：0.02M三乙基磷酸铵的水溶液，pH 6.5，和流动相B：乙腈。

5.如权利要求1所述的制备普卡那肽的方法，其中，用于使式(VII)的双环肽脱盐的反相柱色谱具有：柱规格：250×80mm，介质规格：C-18，10μ，100A°，流动相A：0.025％氢氧化铵，流动相B：乙腈，流动相C：0.1M～0.2M乙酸铵的水溶液，和流动相D：0.1％三氟乙酸的水溶液。

6.如权利要求1所述的制备普卡那肽的方法，其中，用于纯化式(VII)的双环肽的反相柱色谱具有：柱规格：250×80mm，介质规格：C-18，10μ，100A°，流动相A：0.1％～0.2％三氟乙酸的水溶液，和流动相B：乙腈。

7.如权利要求1所述的制备普卡那肽的方法，其中，单环化步骤中的所述合适的试剂为1％～2％H₂O₂溶液。

8.如权利要求1所述的制备普卡那肽的方法，其中，双环化步骤中的所述合适的试剂为2％碘溶液。

9.如权利要求2所述的制备普卡那肽的方法，其中，片段A为Fmoc-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Glu(OtBu)-OH或Boc-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Glu(OtBu)-OH。

10.如权利要求2所述的制备普卡那肽的方法，其中，所述王树脂结合的片段B为H₂N-Leu-Cys(Acm)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Trt)-Thr(OtBu)-Gly-Cys(Acm)-Leu-O-王树脂。

11.如权利要求2所述的制备普卡那肽的方法，其中，所述片段A的长度不超过5个氨基酸单元。