[发明专利]病毒的制造

说明书

本文提供了制造病毒的方法。本文还提供了包含被病毒感染的宿主细胞的生物反应器，该被病毒感染的宿主细胞包含病毒。在一些方面中，本公开内容涉及重组溶瘤病毒例如重组牛痘病毒的生产。

交叉引用

本申请要求2018年11月21日提交的美国临时申请第62/770,577号的权益，该美国临时申请通过引用以其整体并入本文。

背景

病毒可以用于许多领域，例如治疗学，例如溶瘤治疗学。溶瘤病毒在许多类型的癌症的治疗方面具有极大的前景。在许多情况下，通过天然存在的病毒的基因工程产生的重组溶瘤病毒被证明是根除癌细胞的有效工具。然而，溶瘤病毒的治疗应用在许多方面中具有高标准的要求。例如，临床适用的病毒可能需要具有高纯度。可能还需要高滴度的病毒以便在治疗上有效。此外，如何扩大病毒生产用于治疗应用也仍然是巨大的挑战。因此，改进的制造病毒的方法是合意的。

概述

在一个方面中，本公开内容提供了一种制造方法，该方法包括：在生物反应器中培养包含多于一个被病毒感染的宿主细胞的培养物，以产生至少约50噬斑形成单位(PFU)/宿主细胞至约350PFU/宿主细胞的重组溶瘤病毒，其中所述生物反应器包括约0.2m²至约500m²的表面积。

在一个方面中，本公开内容提供了一种制造方法，该方法包括：(i)在生物反应器中培养包含多于一个被病毒感染的宿主细胞的培养物；和(ii)从所述培养物中收获重组溶瘤病毒的群体，其中所述收获包括裂解所述培养物以产生包含所述重组溶瘤病毒的群体的裂解物，和(iii)澄清所述裂解物以产生经纯化的重组溶瘤病毒的群体，其中所述经纯化的重组溶瘤病毒的群体占所述裂解物中的所述重组溶瘤病毒的群体的至少约50％至约90％，并且其中所述生物反应器包括约0.2m²至约500m²的表面积。

在一个方面中，本公开内容提供了一种制造方法，该方法包括：从在生物反应器中培养的包含多于一个被病毒感染的宿主细胞的培养物中收获重组溶瘤病毒的群体，其中所述群体包含约1.5×10¹¹PFU至约5×10¹³PFU的所述重组溶瘤病毒，并且其中所述生物反应器包括约0.2m²至约500m²的表面积。

在一个方面中，本公开内容提供了一种制造方法，该方法包括：从在生物反应器中培养的包含多于一个被病毒感染的宿主细胞的培养物中收获重组溶瘤病毒的群体，其中所述群体包含约1.5×10⁸PFU/mL所述培养物至约2×10¹⁰PFU/mL所述培养物的病毒滴度，其中生物反应器包括约0.2m²至约500m²的表面积。

在一个方面中，本公开内容提供了一种制造方法，该方法包括：(i)在生物反应器中培养包含多于一个被病毒感染的宿主细胞的培养物；和(ii)从所述培养物中收获重组溶瘤病毒的群体，其中所述生物反应器包括约0.2m²至约500m²的表面积，并且其中所述收获在碱性条件进行。

在一个方面中，本公开内容提供了一种制造方法，该方法包括：在生物反应器中培养包含多于一个被病毒感染的宿主细胞的培养物，以产生重组溶瘤病毒的群体，其中所述多于一个被病毒感染的宿主细胞已经被约0.0001PFU/细胞至约0.01PFU/细胞的感染复数(m.o.i.)的病毒感染，并且其中所述生物反应器包括约0.2m²至约500m²的表面积。