[发明专利]用于测定肿瘤微环境组成的方法和组合物

权利要求书

1.一种测定实体瘤微环境组成的方法，该方法包括步骤：

(a)将源自实体瘤的细胞的单细胞悬液与能够结合癌细胞和/或免疫细胞上表达的相应多种细胞表面标志物的多种标记试剂组合，其中细胞表面标志物包括细胞类型标记、免疫调节受体(IMR)和IMR配体(IMR-L)，并允许所述试剂同时与单细胞悬液中存在的癌细胞、免疫细胞或癌细胞和免疫细胞两者结合以产生标记的细胞；和

(b)通过细胞计量术确定标记的细胞的存在和/或含量，从而(i)确定实体瘤微环境中存在的癌细胞、免疫细胞或癌细胞和免疫细胞两者的存在和/或含量和(ii)确定癌细胞、免疫细胞或癌细胞和免疫细胞两者是否表达至少一种IMR和/或至少一种IMR-L，从而确定实体瘤微环境。

2.权利要求1的方法，其中细胞计量术选自由流式细胞术、质谱细胞术、图像细胞术和单细胞技术(SCT)组成的组。

3.权利要求1或2的方法，其中多种标记试剂包括至少一种选自由荧光团、红外标记和重金属标记的标记试剂组成的组。

4.之前任一项权利要求的方法，其中免疫细胞包括淋巴细胞(例如，T细胞(例如，CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg)、B-细胞和自然杀伤细胞)、骨髓细胞(例如，树突细胞、巨噬细胞和骨髓源性抑制细胞)，或其组合。

5.之前任一项权利要求的方法，其中细胞表面标志物进一步包括细胞活化标志物。

6.权利要求5的方法，其中细胞类型标志物包括在淋巴细胞(例如，T细胞(例如，CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg)、B-细胞和自然杀伤细胞)和/或骨髓细胞(例如，树突细胞、巨噬细胞和骨髓源性抑制细胞)上表达的标志物。

7.之前任一项权利要求的方法，其中细胞类型标志物是癌细胞标志物。

8.权利要求7的方法，其中癌细胞标志物包括CD44、CD47、CD49f、CD271、CD326、细胞角蛋白(胞内)、E-钙粘蛋白和/或波形蛋白。

9.权利要求5的方法，其中细胞活化标志物包括CD25、CD26、CD27、CD28、CD38、CD40、CD44、CD62L、CD69、CD80、CD86、CD95、CD95L、CD127、CCR7(CD197)和/或功能标志物，例如，IFNγ、TNFα和/或其他细胞因子和/或颗粒酶B。

10.权利要求1-9任一项的方法，其中IMR或IMR-L标志物包括PD-1(CD279)、PD-L1(CD274)、CTLA-4(CD152)、LAG3(CD223)、OX40(CD134)、TIM3(CD366)，GITR(CD357)、4-1BB(CD137)、KIR(CD158B)、2B4(CD244)、ICOS(CD278)、IDO、TIGIT、CD73、CD39、CD172a(SIRPa)、B7H4(B7S1)、VISTA(B7-H5)、CD355(CRTAM)、KLRG1、CD160(BY55、NK1、NK28)、CD30(TNFRSF8)、CD224(GGT1)、CD226、CD272(BTLA)和/或CD115(CSF-1R)。

11.权利要求1-10任一项的方法，进一步包括将细胞与免疫调节剂组合的步骤。

12.权利要求11的方法，进一步包括确定免疫调节剂对癌细胞和/或免疫细胞上的至少一部分细胞标志物表达的作用。