[发明专利]抗体融合蛋白、制备方法及其应用

权利要求书

1.抗体融合蛋白，其特征在于，其包括：

特异性结合第一抗原的抗体的轻链可变区、轻链恒定区、柔性肽以及特异性结合第二抗原的融合蛋白，即VL-CL-linker-Trap；和

特异性结合第一抗原的抗体的重链可变区、重链恒定区1、部分铰链区、柔性肽以及特异性结合第二抗原的融合蛋白，即VH-CH1-Patialhinge-linker-Trap；

或所述抗体融合蛋白包括：

特异性结合第一抗原的抗体的轻链；和

特异性结合第一抗原的抗体的重链可变区、重链恒定区1、重链恒定区2和重链恒定区3、柔性肽、特异性结合第二抗原的融合蛋白，即VH-CH1-CH2-CH3-linker-Trap；

其中，所述抗体融合蛋白能够特异性的结合hPD-L1和hVEGF-A；

所述第一抗原为hPD-L1，所述第二抗原为hVEGF-A，所述结合第二抗原的融合蛋白Trap的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述结合第一抗原的抗体的轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.如权利要求1所述的抗体融合蛋白，其特征在于，所述柔性肽为(G4S)n，其中n为大于0的整数。

3.如权利要求2所述的抗体融合蛋白，其特征在于，所述n为1～10的整数。

4.如权利要求1至3任一项所述的抗体融合蛋白，其特征在于，所述轻链恒定区和所述重链恒定区1能够形成异源二聚体，所述轻链恒定区的末端半胱氨酸残基可以与重链的铰链区上的半胱氨酸残基形成二硫键。

5.如权利要求1至3任一项所述的抗体融合蛋白，其特征在于，重链的铰链区之间的半胱氨酸残基能形成二硫键。

6.如权利要求4所述的抗体融合蛋白，其特征在于，重链的铰链区之间的半胱氨酸残基能形成二硫键。

7.如权利要求1至3任一项所述的抗体融合蛋白，其特征在于，其中，第一重链的重链恒定区3的结构域和第二重链的重链恒定区3的结构域被改变为促进形成所述抗体融合蛋白的结构。

8.如权利要求4所述的抗体融合蛋白，其特征在于，其中，第一重链的重链恒定区3的结构域和第二重链的重链恒定区3的结构域被改变为促进形成所述抗体融合蛋白的结构。

9.如权利要求5所述的抗体融合蛋白，其特征在于，其中，第一重链的重链恒定区3的结构域和第二重链的重链恒定区3的结构域被改变为促进形成所述抗体融合蛋白的结构。

10.如权利要求6所述的抗体融合蛋白，其特征在于，其中，第一重链的重链恒定区3的结构域和第二重链的重链恒定区3的结构域被改变为促进形成所述抗体融合蛋白的结构。

11.如权利要求7所述的抗体融合蛋白，其特征在于，所述改变为：

c)改变第一重链的重链恒定区3的结构域：在与二价双特异性抗体内的第二重链的重链恒定区3的结构域的初始界面相接触的第一重链的重链恒定区3的结构域的初始界面内，氨基酸残基被替换为具有大于原始氨基酸残基体积的氨基酸残基，在所述第一重链的重链恒定区3的结构域的界面内生成凸起，所述凸起可以定位在所述第二重链的重链恒定区3的结构域的界面内的凹洞中；且

d)改变第二重链的重链恒定区3的结构域：在与二价双特异性抗体内的第一重链的重链恒定区3的结构域的初始界面相接触的第二重链的重链恒定区3的结构域的初始界面内，氨基酸残基被替换为具有小于原始氨基酸残基体积的氨基酸残基，在所述第二重链的重链恒定区3的结构域的界面内生成凹洞，在所述凹洞中可以定位所述第一重链的重链恒定区3的结构域的界面内的凸起。