[发明专利]用于分化间充质干细胞的方法

权利要求书

1.从间充质干细胞(MSC)获得成软骨-成骨细胞谱系的MSC衍生细胞的方法，所述方法包括：

(a)在包含成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、转化生长因子β(TGFβ)和浓度为至少0.01IU/ml的肝素或其衍生物或类似物的培养基中培养从受试者的生物样品回收的MSC，从而获得间充质干细胞(MSC)衍生细胞；

(b)第一次传代所述MSC衍生细胞，并在如(a)中定义的培养基中进一步培养所述MSC衍生细胞；和

(c)第二次传代所述MSC衍生细胞，并在如(a)中定义的培养基中进一步培养所述MSC衍生细胞，从而获得所述成软骨-成骨细胞谱系的MSC衍生细胞，

其中在步骤(b)中培养所述MSC衍生细胞达X天的时段，其中第X天是至少20％的所述MSC衍生细胞增殖的最后一天。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(b)中培养所述MSC衍生细胞约8天至约12天的时段，优选约10天的时段。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在步骤(a)中培养所述MSC衍生细胞约13天至约15天的时段，优选约14天的时段。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中在步骤(c)中培养所述MSC衍生细胞约10天至约14天的时段，优选约12天的时段。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述增殖的MSC衍生细胞处于细胞周期的S期、G2期或M期。

6.从MSC获得成软骨-成骨细胞谱系的MSC衍生细胞的方法，所述方法包括：

(a)在包含FGF-2、TGFβ和浓度为至少0.01IU/ml的肝素或其衍生物或类似物的培养基中培养从受试者的生物样品回收的MSC，从而获得MSC衍生细胞；

(b)第一次传代所述MSC衍生细胞，并在如(a)中定义的培养基中进一步培养所述MSC衍生细胞；以及

(c)第二次传代所述MSC衍生细胞，并在如(a)中定义的培养基中进一步培养所述MSC衍生细胞，从而获得所述成软骨-成骨细胞谱系的MSC衍生细胞，

其中在步骤(b)中将所述MSC衍生细胞以3×10²至1×10³个细胞/cm²的密度，优选以3×10²至8×10²个细胞/cm²的密度接种以进一步培养。

7.根据权利要求6所述的方法，其中在步骤(c)中将所述MSC衍生细胞以3×10²至1×10³个细胞/cm²的密度，优选以3×10²至8×10²个细胞/cm²的密度接种以进一步培养。

8.从MSC获得成软骨-成骨细胞谱系的MSC衍生细胞的方法，所述方法包括：

(a)在包含FGF-2、TGFβ和浓度为至少0.01IU/ml的肝素或其衍生物或类似物的培养基中培养从受试者的生物样品回收的MSC，从而获得MSC衍生细胞；

(b)第一次传代所述MSC衍生细胞，并在如(a)中定义的培养基中进一步培养所述MSC衍生细胞；

(c)第二次传代所述MSC衍生细胞，并在如(a)中定义的培养基中进一步培养所述MSC衍生细胞，从而获得所述成软骨-成骨细胞谱系的MSC衍生细胞；

(d)将所述成软骨-成骨细胞谱系的MSC衍生细胞重悬于适于向受试者施用的冷冻保存介质中；以及

(e)冷冻保存所述成软骨-成骨细胞谱系的MSC衍生细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在步骤(d)中将所述成软骨-成骨细胞谱系的MSC衍生细胞以约1×10⁷/ml至约1×10⁸/ml的浓度，优选约2×10⁷/ml至约4×10⁷/ml的浓度重悬于所述冷冻保存介质中。