[发明专利]避免藻类中的外源核酸的表观遗传沉默

权利要求书

1.一种突变体光合生物，其包含编码具有CHG DNA甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因，其中与不具有编码具有CHG DNA甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比，所述突变体光合微生物具有降低的CHG DNA甲基化。

2.根据权利要求1所述的突变体光合生物，其中所述突变体是基因工程化突变体。

3.根据权利要求2所述的突变体光合生物，其中所述突变体已通过插入诱变、基因置换、RNAi、反义RNA、大范围核酸酶基因组工程化、一种或多种核酶和/或CRISPR/Cas系统进行基因工程化。

4.根据权利要求3所述的突变体光合生物，其中所述突变体已通过CRISPR/Cas系统进行基因工程化。

5.根据权利要求1所述的突变体光合生物，其中所述突变体已通过UV辐照、γ辐照或化学诱变生成。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的突变体光合生物，其中所述突变或减弱是在编码具有CHG DNA甲基转移酶活性的多肽的基因中，所述多肽包含在所述基因的所述突变或减弱之前与SEQ ID NO:1、3、5、7或28的氨基酸序列具有至少80％一致性的氨基酸序列。

7.根据权利要求6所述的突变体光合生物，其中具有CHG DNA甲基转移酶活性的所述多肽包含在所述基因的所述突变或减弱之前与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少80％一致性的氨基酸序列。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的突变体光合生物，其中所述突变体光合生物包含外源DNA，并且其中所述降低的CHG DNA甲基化是在所述外源DNA中。

9.根据权利要求8所述的突变体光合生物，其中所述外源DNA整合到所述光合生物的所述基因组中。

10.根据权利要求1至7中任一项所述的突变体光合生物，其中所述降低的CHG DNA甲基化是在所述光合生物的天然DNA中。

11.根据权利要求10所述的突变体光合生物，其中所述其中所述降低的CHG DNA甲基化是在所述突变体光合生物的着丝粒或高度重复DNA区域中。

12.根据权利要求8至9中任一项所述的突变体光合生物，其中与包含所述外源核酸但不具有编码具有CHG DNA甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比，所述外源核酸的表达得到改进。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的突变体光合生物，其中所述突变体光合生物具有降低的组蛋白H3的赖氨酸9(H3K9)的单甲基化或三甲基化。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的突变体光合生物，其中与不具有编码具有CHGDNA甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比，所述突变体光合生物具有降低的CHH DNA甲基化。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的突变体光合生物，其中所述光合生物是藻类。

16.一种增强光合生物中的外源DNA的表达的方法，其包含：

a)将外源DNA引入到所述光合生物中；

b)使编码具有CHG DNA甲基转移酶活性的多肽的基因突变或减弱，其中与包含所述外源DNA但不具有编码具有CHG DNA甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比，所述突变体微生物具有降低的所述外源DNA的CHG DNA甲基化；其中与所述对照光合生物相比，所述外源DNA的表达在所述光合生物中增强。