[发明专利]来自被检测体的皮肤细胞的核酸的制备方法

说明书

本发明提供一种高精度地分析被检测体的RNA的方法。来自被检测体的皮肤细胞的核酸的制备方法包括在0℃以下保存从被检测体采集的含有RNA的皮肤表层脂质的步骤。来自被检测体的皮肤细胞的核酸的制备方法包括将被检测体的皮肤表层脂质所含的RNA转变为cDNA后，利用多重PCR进行扩增，再对所得到的反应产物进行精制的步骤。

技术领域

本发明涉及来自被检测体的皮肤细胞的核酸的制备方法和使用该核酸的被检测体的皮肤的分析方法。

背景技术

已经开发了通过分析生物体试样中的分子(核酸、蛋白质、代谢物等)来研究人体内的现在乃至将来的生理状态的技术。其中，对于利用核酸分子的分析，已经建立了全面的分析方法，因此具有如下的优点：通过一次分析得到丰富的信息，以及基于与单核苷酸多态性、RNA功能等有关的多个研究报告，分析结果的功能关联变得容易。

在生物体的各种组织中，皮肤由于与外界接触，因此作为能够侵入性低地采集生物体试样的组织而受到关注。作为来自皮肤的非侵入的核酸的采集和分析方法，报告了利用湿润的药棉拭子(棉球)擦拭皮肤表面，由此采集人皮肤样品，进行RNA特征分析(Profiling)(非专利文献1)。在专利文献1中记载了从皮肤表层脂质中分离来自被检测体的皮肤细胞的RNA等的核酸，用作生物体的分析用的试样。

(专利文献1)国际公开公报第2018/008319号

(非专利文献1)Forensic Sci Int Genet,2012,6(5):565-577

发明内容

在一个实施方式中，本发明提供一种来自被检测体的皮肤细胞的核酸的制备方法，其包括在0℃以下保存从被检测体采集的含有RNA的皮肤表层脂质的步骤。

在另一个实施方式中，本发明提供一种来自被检测体的皮肤细胞的核酸的制备方法，其包括：通过逆转录将被检测体的皮肤表层脂质所含的RNA转变为cDNA，接着对该cDNA进行多重PCR的步骤；和对该PCR的反应产物进行精制的步骤。

在另一个实施方式中，本发明提供一种被检测体的皮肤、皮肤以外的部位或全身状态的分析方法，其包括对利用上述方法所制备的核酸进行分析的步骤。

在另一个实施方式中，本发明提供一种皮肤外用剂、皮内给药剂、贴剂、口服剂或注射剂对被检测体的效果或效能的评价方法，其包括对利用上述方法所制备的核酸进行分析的步骤。

在另一个实施方式中，本发明提供一种被检测体的血中成分浓度的分析方法，其包括对利用上述方法所制备的核酸进行分析的步骤。

附图说明

图1是保存温度对SSL中RNA的稳定性的影响。18S：18S核糖体RNA，28S：28S核糖体RNA。

图2是来自SSL的RNA中的特应性皮炎相关标记的表达。

图3是基于机器学习模型并根据来自SSL的RNA表达量得到的血中睾酮浓度的预测值。纵轴表示预测值，横轴表示实测值。

图4是基于机器学习模型并根据来自SSL的RNA表达量得到的血中的各种成分的浓度的预测结果。

图5是基于表达因洗面奶的使用而上升的22种RNA组的表达量(0天)得到的被检验者的分组。

图6是因使用洗面奶而引起的角质层水分量的变化。

图7是基于问卷结果的确实感受到使用洗面奶后的保湿效果的人的比例。

图8是皮脂分泌量高的组、低的组中BSG和HCAR2的表达。

图9是水分量高的组、低的组中ASPRV1和PADI3的表达。

图10是皮肤发红高的组、低的组中SOCS3、JUNB和IL-1B的表达。