[发明专利]由冷冻保存的肿瘤样品扩增TIL有效
| 申请号： | 201980071527.4 | 申请日： | 2019-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN112930114B | 公开（公告）日： | 2023-10-03 |
| 发明（设计）人： | A·维普塔朗;K·奥尼姆斯 | 申请（专利权）人： | 艾欧凡斯生物治疗公司 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078;A01N1/02;A61K35/17 |
| 代理公司： | 上海华诚知识产权代理有限公司 31300 | 代理人： | 李晓 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 冷冻 保存 肿瘤 样品 扩增 til | ||
1.一种冷冻保存肿瘤组织以生产肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的方法，所述方法包括：
(i)破碎肿瘤组织；
(ii)在冷冻保存培养基中孵育碎片；以及
(iii)冷冻碎片，其中，所述冷冻是使用液氮的蒸汽相进行的速冻。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，将肿瘤组织破碎成直径为约1.5mm至6mm的近似球形的碎片。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述近似球形的碎片的直径为约6mm。
4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述近似球形的碎片的直径为约3mm。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，将肿瘤组织破碎成最短边缘长度为至少1.5mm、最长边缘长度为约6mm的大致矩形的碎片。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，将肿瘤组织破碎成边缘长度为约1.5mm至约6mm的大致立方体的碎片。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述大致立方体的碎片的边缘长度为约6mm。
8.根据权利要求6所述的方法，其中，所述大致立方体的碎片的边缘长度为约3mm。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤组织来自解剖的肿瘤。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述解剖的肿瘤为不到8小时大。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述冷冻保存培养基包含2％v/v至15％v/v的二甲基亚砜(DMSO)。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述冷冻保存培养基包含约10％v/v DMSO。
13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述冷冻保存培养基包含至少一种抗微生物剂。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述至少一种抗微生物剂是浓度为至少50μg/mL的庆大霉素。
15.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述冷冻保存培养基中孵育所述肿瘤碎片约30分钟至约80分钟。
16.根据权利要求1所述的方法，其中，在约2℃至8℃的温度下在所述冷冻保存培养基中孵育所述肿瘤碎片。
17.根据权利要求1所述的方法，其中，在孵育之前，用生理缓冲等渗盐溶液洗涤所述肿瘤组织。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述洗涤包括三次连续洗涤、每次洗涤至少三分钟，每次连续洗涤后均更换生理缓冲等渗盐溶液。
19.根据权利要求1所述的方法，其中，所述冷冻在-125℃至约-196℃的温度下进行。
20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述冷冻在约-140℃至约-175℃的温度下进行。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述冷冻在约-145℃的温度下进行。
22.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括步骤(iv)：将冷冻的碎片储存在低于至少-130℃下。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，将冷冻的碎片储存在液氮的蒸汽相中。
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