[发明专利]编辑RNA的方法和组合物

权利要求书

1.一种体外编辑宿主细胞中靶标RNA的方法，包含将dRNA或编码所述dRNA的构建体引入所述宿主细胞，其中，所述dRNA包含与所述靶标RNA杂交的互补RNA序列和与所述靶标RNA中的靶腺苷正对的胞苷或腺苷错配，所述胞苷或腺苷错配位于所述dRNA中距所述互补序列的3'端至少20个核苷酸，并且距所述互补序列的5'端至少5个核苷酸，所述dRNA不包含腺苷脱氨酶募集结构域，所述dRNA的长度为51-260个不包含化学修饰的核苷酸，所述dRNA能够募集内源地存在于宿主细胞中的ADAR1或ADAR2以使所述靶标RNA中的靶标腺苷脱氨基，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述dRNA的长度为70-260个核苷酸。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述dRNA的长度为100至150个核苷酸。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞是原代细胞。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述宿主细胞是T细胞。

6.如权利要求1所述的方法，其包括将编码所述dRNA的构建体引入所述宿主细胞，其中所述构建体是病毒载体或质粒。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述胞苷错配位于所述dRNA中所述互补序列中心的10个核苷酸内。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述互补序列还包含一个或多个鸟苷，其各自与所述靶标RNA中的非靶腺苷相对。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述互补序列包含与所述靶标RNA中的非靶腺苷相对的两个或更多个连续错配核苷酸。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述靶标RNA中所述靶标腺苷的5'侧最近邻位是选自U，C，A和G的核苷酸，优先度UC≈A G，而所述靶标RNA中所述靶标腺苷的3'侧最近邻位是选自G，C，A和U的核苷酸，优先度G CA≈U。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述靶标RNA中的所述靶标腺苷位于选自由UAG，UAC，UAA，UAU，CAG，CAC，CAA，CAU，AAG，AAC，AAA，AAU，GAG，GAC，GAA和GAU构成的组的三碱基基序中。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述三碱基基序是UAG，并且其中所述dRNA包含与所述三碱基基序中的尿苷正对的A，与所述靶标腺苷正对的胞苷，以及与所述三碱基基序中的鸟苷正对的胞苷、鸟苷或尿苷。

13.如权利要求1所述的方法，其中所述靶标RNA是选自由前信使RNA，信使RNA，核糖体RNA，转移RNA，长非编码RNA和小RNA构成的组的RNA。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述靶标RNA是前信使RNA。

15.如权利要求1所述的方法，其进一步包括将ADAR3的抑制剂引入所述宿主细胞。

16.如权利要求1所述的方法，其进一步包括将干扰素的刺激物引入所述宿主细胞。

17.如权利要求1所述的方法，其包括引入分别靶向不同靶标RNA的多个dRNA。

18.如权利要求1所述的方法，其中编辑所述靶标RNA的效率为至少5％。

19.如权利要求1所述的方法，其中所述dRNA不诱导免疫应答。