[发明专利]用于在血液中或在富集PBMC中基因修饰淋巴细胞的方法和组合物

权利要求书

1.一种复制缺陷型重组反转录病毒颗粒的用途，其用于制造用以基因修饰个体的T细胞或NK细胞的试剂盒，其中所述试剂盒的用途包含：

以离体方式使包含所述T细胞和/或所述NK细胞的血细胞在反应混合物中与所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒接触，其中所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒在其表面上包含假型化元件，其中所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒包含聚核苷酸，所述聚核苷酸包含一个或多个以可操作的方式连接至在T细胞和/或NK细胞中具有活性的启动子的转录单元，其中所述一个或多个转录单元编码包含嵌合抗原受体(CAR)的第一多肽、包含淋巴增生性元件(LE)的第一多肽或包含LE的第一多肽和包含CAR的第二多肽，且其中所述接触进行小于15分钟以促进所述T细胞和/或所述NK细胞与所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒的膜融合，由此产生被基因修饰的T细胞和/或被基因修饰的NK细胞。

2.一种被基因修饰的T细胞或NK细胞，其是通过根据一种方法来基因修饰T细胞和/或NK细胞而制备，所述方法包含以离体方式使包含所述T细胞或NK细胞的血细胞在反应混合物中与复制缺陷型重组反转录病毒颗粒接触，其中所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒在其表面上包含假型化元件，其中所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒包含聚核苷酸，所述聚核苷酸包含一个或多个以可操作的方式连接至在T细胞和/或NK细胞中具有活性的启动子的转录单元，其中所述一个或多个转录单元编码包含嵌合抗原受体(CAR)的第一多肽、包含淋巴增生性元件(LE)的第一多肽或包含LE的第一多肽和包含CAR的第二多肽，且其中所述接触进行小于15分钟以促进所述T细胞和/或NK细胞与所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒的膜融合，由此产生所述被基因修饰的T细胞和/或所述被基因修饰的NK细胞。

3.一种用于基因修饰T细胞或NK细胞的方法，其包含以离体方式使包含T细胞和/或NK细胞的血细胞在反应混合物中与复制缺陷型重组反转录病毒颗粒接触，其中所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒在其表面上包含假型化元件，其中所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒包含聚核苷酸，所述聚核苷酸包含一个或多个以可操作的方式连接至在T细胞和/或NK细胞中具有活性的启动子的转录单元，其中所述一个或多个转录单元编码包含嵌合抗原受体(CAR)的第一多肽、包含淋巴增生性元件(LE)的第一多肽或包含LE的第一多肽和包含CAR的第二多肽，且其中所述接触进行小于15分钟以促进所述T细胞和/或所述NK细胞与所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒的膜融合，由此产生所述被基因修饰的T细胞或所述被基因修饰的NK细胞。

4.根据前述权利要求中任一项所述的用途、被基因修饰的T细胞或NK细胞或用于基因修饰和/或转导T细胞或NK细胞的方法，其中所述反应混合物包含至少25％全血。

5.一种反应混合物，其包含复制缺陷型重组反转录病毒颗粒、T细胞活化元件和血细胞，其中所述重组反转录病毒颗粒在其表面上包含假型化元件，其中所述血细胞包含T细胞和/或NK细胞，其中所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒包含聚核苷酸，所述聚核苷酸包含一个或多个以可操作的方式连接至在T细胞和/或NK细胞中具有活性的启动子的转录单元，其中所述一个或多个转录单元编码包含嵌合抗原受体(CAR)的第一多肽、包含淋巴增生性元件(LE)的第一多肽或包含LE的第一多肽和包含CAR的第二多肽，且其中所述反应混合物包含至少25％全血。

6.一种用于基因修饰血液或其组分中的T细胞和/或NK细胞的方法，其包含以离体方式使包含所述T细胞和/或NK细胞的血细胞在包含T细胞活化元件的反应混合物中与复制缺陷型重组反转录病毒颗粒接触，其中所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒在其表面上包含假型化元件，其中所述所述接触促进所述T细胞和/或NK细胞与所述复制缺陷型重组反转录病毒颗粒的缔合，其中所述重组反转录病毒颗粒基因修饰和/或转导所述T细胞和/或NK细胞，且其中所述反应混合物包含至少25％全血。