[发明专利]固定剂溶液及生物样本的制备方法

说明书

本公开的各方面涉及用于寄生虫样本的含有羧酸(优选乙酸)的固定剂。在一些方面，本公开涉及用于寄生虫样本的水性固定剂溶液，其包含：a)浓度为0.5M或更大的C₂至C₆羧酸(优选乙酸)；和b)浓度为0.02M或更大、优选0.04M或更大的C₂至C₆羧酸盐或卤化物盐。任选的组合物包含1.3M乙酸、12mM苯甲酸钠、0.9％氯化钙、0.9％溴化钙、100pg/ml薄荷醇和350pg/ml麝香草酚。所述固定剂不含甲醛或其他有害化合物，并且当使用于寄生虫样本(如卵和蠕虫)时表现出良好的杀虫和染色性能。

技术领域

本发明涉及用于生物样本的组织学固定的固定剂溶液，以及用于检查(例如通过显微镜检查)的生物样本的制备方法。

背景技术

本发明尤其但不排他地涉及适合于固定生物体(特别是寄生虫样本，例如蠕虫卵(helminth ova)或蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia))的固定剂溶液。

要求用于这类应用的固定剂溶液能够杀死生物体(可能是致病性的)并且保持其细胞结构以便随后可以用显微镜对它们进行检查，例如通常是在用染色剂(如台盼蓝(Trypan blue)、鲁戈氏碘液(Lugol’s iodine)或三色染色法(Trichrome stain))进行染色之后。在染色后样本的显微外观受到固定剂溶液的影响，但难以或者无法预测给定配方的固定剂对染色性能的影响。

甲醛已广泛地使用于固定剂溶液(例如，在水溶液中，如同福尔马林)但却具有毒性且致癌，并且通常对于环境是有害的。

还使用了其他固定剂，但在许多情况下也是有害的。

最近，已开发出了无害的固定剂，例如在GB 2528426A(Reardon)和WO 92/19951A(Streck Lab)中所公开的，但仍需要一种能可靠地杀死寄生生物(例如蠕虫)的固定剂溶液，蠕虫具有坚固的外层因而对于固定剂的穿透有高度的抗性。如果排除高毒性的化学品(例如甲醛)，则难以在短时间内实现细胞死亡。

因此，本发明的目的是提供尤其适合于寄生虫样本的组织学固定的相对无害的固定剂。

本发明的另一个目的是提供固定剂及带来良好染色性能的生物样本的制备方法。

发明内容

因此，本发明提供了用于生物样本的水性固定剂溶液，其包含：

a)浓度为0.5M或更大的C₂至C₆羧酸；

b)浓度为0.02M或更大、优选0.04M或更大的C₂至C₆羧酸盐或卤化物盐。

任选地，所述C₂至C₆羧酸是乙酸。

任选地，C₂至C₆羧酸的浓度为0.9M或更大，更优选1.3M或更大。任选地，C₂至C₆羧酸的浓度不大于3.5M。

已发现这种浓度的羧酸(尤其是乙酸)能快速杀死生物体(如蠕虫卵)，例如无需有毒的添加剂，例如甲醛。

在一个任选的优选实施方案中，乙酸的浓度低于10％w/v。低于此限值的浓度归类为无腐蚀性。

组分b)的羧酸盐或卤化物盐可以是例如赋予适当溶解性的碱或碱土金属或铵或其他阳离子的盐。

任选地，组分b)是卤化钙盐或卤化镁盐。

更优选地，组分b)包括浓度为至少0.06M、优选至少0.08M、更优选至少0.1M的氯化钙；和/或浓度为至少0.06M、优选至少0.08M、更优选至少0.1M的溴化钙。