[发明专利]制备无病毒血小板裂解物材料的方法

说明书

本发明涉及一种用于制备活细胞培养底物的材料的制备方法。本发明进一步涉及血小板裂解物材料及其用途。本发明提出问题的解决方案基于至少两种不同处理方法与不同病毒灭活程序的组合。结合使用两种或两种以上的病毒颗粒和/或病毒成分灭活程序，可以确保灭活各种病毒(例如包膜和非包膜病毒)，从而为临床和药物应用提供安全的产品。此外，还提供一种包含血小板裂解物的血小板裂解物材料，其中所述材料是基本上不含病毒颗粒和/或病毒成分的液体或干燥材料。

发明背景

本发明主要涉及一种用于制备活细胞培养底物的材料的制造方法。本发明进一步涉及血小板裂解物材料及其用途。

现有技术

细胞通常在补充胎牛血清(FCS)或其他血液血清的培养基中培养，以便为细胞提供必需的生长因子。尽管实际上并不是任何类型的细胞都需要血清进行培养，但是，到目前为止，大多数敏感细胞(例如干细胞)仍然依赖于含血清的培养基。然而，鉴于潜在的异种免疫反应(例如抗-FCS抗体)、牛病原体(病毒和朊病毒)以及妨碍结果重现性的高度批次间差异性，因此在治疗应用方面，人们越来越避免使用FCS。化学定义的合成培养基现在可以在市场上买到，但它们的精确组成常常是不公开的，而且它们通常包括其他异种成分，如重组生长因子。

人血小板裂解物(HPL)由于不含任何异种成分，因此已被证明是干细胞扩增的最佳选择，不仅在基础研究中，而且在临床和治疗应用中也是如此。

WO 2017/207688 A1涉及一种三维凝胶状底物制备用材料的制备方法，其中提供血小板浓缩物并且从该血小板浓缩物收获血小板。然后，将血小板裂解得到血小板裂解物，并且然后将所述血小板裂解物冻干，从而提供干燥的血小板裂解物材料。所述冻干材料很容易在使用地点加水重构，从而提供具有全部功能的血小板裂解物凝胶，可用于培养活细胞而不受任何限制。因此，该方法有助于凝胶材料的运输，并确保血小板裂解物凝胶的保存期限更长，而对细胞培养特性没有任何影响。

从US 2013/0195959 A1可以知晓一种制备冻干血小板裂解物的方法。该文献公开了一种制备适合治疗用途或用作培养基的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：从血小板源浓缩血小板以形成血小板源的富血小板部分，以及将富血小板部分中的血小板进行裂解，从而形成多种裂解物。另一步骤包括冻干裂解物，从而在具有释放浓度的可用生长因子、细胞因子和趋化因子的组合物中形成冻干血小板裂解物。这些冻干的血小板裂解物可以以干燥形式施用或在施用前重新水化，或以凝胶形式施用。

此外，WO 2013/076507 A2公开了包含血小板裂解物的药物组合物及其治疗用途。所述组合物可用于治疗伤口。将血小板裂解物冻干，得到含有生长因子的稳定的冻干粉末，其可用于伤口愈合治疗应用，但也可用于其中对递送自然生长因子的需求增加的其它治疗应用。冻干的血小板裂解物可在培养基或生理盐水中再悬浮，过滤消毒，然后用于制备富含血小板的血浆凝胶。

然而，尽管人血小板裂解物是培养间充质干细胞(MSC)的常用补充物，与胎牛血清相比，它不存在异种免疫反应或牛病原体传播的风险，但在临床和药物应用方面仍然存在病毒污染的问题。特别是对于任何基于人源性辅助材料的临床应用来说，病毒安全性是需要考虑的主要方面之一。因此，当制备用于扩增干细胞或其他治疗上适用细胞的底物时，减少或完全消除任何病毒污染风险至关重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于制备活细胞培养底物的材料的制备方法，所述方法完全消除或至少降低任何病毒污染的风险。

所述目的通过提供一种用于制备活细胞培养底物的材料的制备方法得以实现，所述方法包括：

-提供血小板裂解物，以及

-使所述血小板裂解物经历至少两种不同的处理，每种处理能够使病毒颗粒和/或病毒组分失活，从而提供无病毒或至少病毒减少的血小板裂解物材料。