[发明专利]肿瘤超反应性免疫细胞(TURIC)的制备和选择

权利要求书

1.一种制备包含肿瘤超反应性免疫细胞(TURICS)的T细胞产品的方法，其包括以下步骤：

a)提供含有患者T细胞的机体样品；

b)可选地从所述机体样品中分离所述T细胞；

c)在体外在存在有包括细胞因子白介素2(IL-2)、白介素15(IL-15)和白介素21(IL-21)的细胞因子混合物与刺激肽或一组刺激肽的情况下，刺激所述T细胞；

d)确定T细胞样品中的反应性因子，其中所述反应性因子指示是否存在靶向所述刺激肽或所述一组刺激肽中的至少一种肽的T细胞；

e)如果所述反应性因子为阳性，则将所述T细胞样品鉴定为肿瘤反应性T细胞样品；否则将所述T细胞样品鉴定为非反应性T细胞样品；

f)在体外在存在有包括IL-2、IL-15和IL-21的细胞因子混合物与一种自体肿瘤细胞或者所述刺激肽或所述一组刺激肽的情况下，培养所述非反应性样品以形成T-细胞产品；

g)可选地在体外在存在有包括IL-2、IL-15和IL-21的细胞因子混合物与所述刺激肽或所述一组刺激肽的情况下，刺激所述T细胞产品；

h)测定所述T细胞产品中的反应性因子；以及

i)如果所述反应性因子为阳性，则选择所述T细胞产品作为所述包含TURICS的T细胞产品。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一组刺激肽由至多20种不同的刺激肽组成，优选由至多10种不同的刺激肽组成，更优选由至多五种不同的刺激肽组成。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述刺激肽是突变的或非突变的肿瘤特异性肽，其中，所述突变的肿瘤特异性肽包含这样的氨基酸序列，其具有在患者的肿瘤细胞而非在患者健康组织的细胞中发现的突变。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述突变位于所述肽的中部。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述刺激肽的长度在5至31个氨基酸、优选7至25个氨基酸、更优选9至21个氨基酸的范围内。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述T细胞和/或所述T细胞产品的刺激是针对10²至10⁸个细胞、优选10³至10⁶个细胞、更优选10⁴至10⁵个细胞进行的。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，将所述T细胞和/或所述T细胞产品刺激1小时至10天，优选3小时至5天，更优选1天至3天。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述非反应性T细胞样品被培养1至10天，优选3至9天，更优选6至8天。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在步骤c)和步骤g)中，所述刺激肽或所述一组刺激肽中的每种肽以1pg/10⁵个细胞至1mg/10⁵个细胞的浓度、优选以1ng/10⁵个细胞至100μg/10⁵个细胞的浓度、更优选以1μg/10⁵个细胞至10μg/10⁵个细胞的浓度存在。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述非反应性T细胞样品与所述自体肿瘤细胞以1000:1至1:1000的比例、优选以10:1至1:10的比例、更优选以7:1至3:1的比例进行培养。