[发明专利]用于调节蛋白糖基化的细胞培养策略

权利要求书

1.一种用于在细胞培养中调节目的糖蛋白的糖基化模式的方法，其包括：

以单独或以任何组合的方式调节在细胞培养基中和/或在细胞培养环境中的以下参数：

a.在高分压CO₂(pCO₂)条件下，Mn浓度从约1nM至约20000nM；

b.在低pCO₂条件下，Mn浓度从约1nM至约30000nM；

c.pCO₂从约10mmHg至约250mmHg；

d.在约25℃至39℃的温度，接种前细胞培养基保存持续时间从约0小时至约120小时；

e.细胞培养持续时间从约0天至约150天；

f.Na+浓度从约0mM至约300mM；

g.重量摩尔渗透压浓度从约250mOsm/kg至约550mOsm/kg；

h.半乳糖浓度从约0mM至约60mM；

i.岩藻糖浓度从约0mM至约60mM；以及

j.培养温度从约29℃至约39℃。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞培养环境是在有或没有细胞的生物反应器中。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述低pCO₂条件为从约10mmHg至约100mmHg，并且所述高pCO₂条件为从约20mmHg至约250mmHg。

4.根据权利要求3所述的方法，其中pCO₂调节的持续时间至少覆盖所述细胞培养持续时间的前一半。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述目的糖蛋白为重组蛋白。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述重组蛋白为抗体或抗体片段、scFv(单链可变片段)、BsDb(双特异性双抗体)、scBsDb(单链双特异性双抗体)、scBsTaFv(单链双特异性串联可变结构域)、DNL-(Fab)3(对接锁定三价Fab)、sdAb(单结构域抗体)和BssdAb(双特异性单结构域抗体)。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗体为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗体为抗CD20抗体。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD20抗体为奥瑞珠单抗。

10.根据权利要求6至8所述的方法，其中所述抗体或抗体片段表现出：

i)G0-F％(非岩藻糖基化糖蛋白百分比)为约0％至约20％；约1％至约15％；约1％至约10％；或约1％至约8％；或归一化G0-F％为约0％至约20％；约1％至约15％；约1％至约10％；或约1％至约8％；和/或，

ii)G0％(非半乳糖基化糖蛋白百分比)为约40％至约90％、约50％至约90％、约55％至约85％、或约60％至约80％。

11.根据权利要求6至9所述的方法，其中所述糖基化经调节以实现：

a.增加的非岩藻糖基化(例如，G0-F(非岩藻糖基化的G0))，同时降低非半乳糖基化(例如，G0(岩藻糖基化的、非半乳糖基化的G0))；或者，

b.降低的非岩藻糖基化(例如，G0-F)，同时增加非半乳糖基化(例如，G0)；或者，

c.增加或降低的非岩藻糖基化(例如，G0-F)而不影响非半乳糖基化(例如，G0)；或者，

d.增加或降低的非半乳糖基化(例如，G0)而不影响非岩藻糖基化(例如G0-F)。